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本研究旨在探讨人基质金属蛋白酶3(Matrix Metalloproteinase 3,MMP-3)基因5’调控区域和编码区的单核苷酸多态性与食管癌易感性的关系。首先运用SPSS软件对5,调控区与我们通过SNP基因分型研究已确定的食管癌高危易感性相关的SNPs位点进行Logistic回归分析,再依据mmp3基因编码区关键的SNPs位点的数据运用HaploView软件进行SNPs连锁分析,确定高危型SNP和低危型SNP的不同SNP单倍型组合。利用生物信息学方法在mmp3基因5’调控区域中搜索和比对其DNA序列中潜在的转录调控元件和转录因子识别结合位点。并与食管癌高危易感性相关的SNPs基因型相比较,选定可能影响mmp3基因表达过程中转录调控的关键位点和序列。选择高危型和低危型的不同单倍型组合的病人血样,通过蛋白酶K法提取白细胞基因组DNA,利用PCR得到mmp3基因5’调控区域上游2120bp DNA片段将其插入/替换pEGFP-N1真核表达载体上的启动子区域,转染DNA进哺乳动物细胞并在其中检测下游报告基因--绿色荧光蛋白表达量的变化。Trizol法提取细胞总RNA,RT-PCR获得mmp3翻译表达DNA编码序列并构建mmp3真核表达载体。实验结果:(1)结合前期研究以及SPSS分析结果,确定mmp3基因5,调控区的4个关键SNP位点rs494963(G/T)、rs632478(A/C)、rs522616(A/G)和rs617819(C/G)高危型分别为GG、CC、AA、GG。(2)HaploView分析结果表明mmp3基因内8个食管癌高危易感性相关的SNPs位点在河南人群中的连锁不平衡D’值明显高于湖北人,特别是河南人群男性的高危易感SNPs的更高连锁D’值和种类与多年的河南人群食管癌流行病学调查的规律是一致的。(3)5’调控区域上游2120bp DNA片段插入/替换pEGFP-N1真核表达载体上的启动子区域,实验组下游报告基因--绿色荧光蛋白表达量高于对照组,这说明插入的含高危单倍型的mmp3基因5’调控区域DNA序列可能有更强启动效率表达下游基因mmp3。