论文部分内容阅读
第一部分SD大鼠骨髓间充质干细胞的分离提纯、鉴定及分化目的：探讨SD大鼠BMD-MSCs进行体外扩增,并观察其的生物学特性,表面标记物及分化能力的鉴定。方法：全骨髓贴壁分离法分离SD大鼠骨髓细胞,传代扩增,倒置相差显微镜进行形态学观察,流式细胞术鉴定细胞。结果：原代细胞呈长梭形、旋涡状生长,传代细胞多成纤维形状,第3代培养细胞表面分子CD29, CD90, CD44呈阳性表达,但不表达CD34及CD45。结论：1.全骨髓细胞贴壁分离法可以成功分离培养出干细胞并传代扩增至多代形态不变。2.经流式细胞术鉴定传代过程中纯度不断提高。3.在体外一定诱导条件下成功诱导分化成成骨细胞和成脂肪细胞。第二部分同种异体骨髓间充质干细胞移植对光气引起肺损伤的保护作用目的：通过观察光气致肺损伤后大鼠症状、炎症指标及肺泡上皮细胞标志物的变化,来探讨BMD-MSCs干预是否对肺组织有保护作用。方法：1.取96只SD大鼠随机分为4组,即K组：正常对照组经尾静脉注射1ml PBS:PH组：暴露与浓度为8.33g/m3的光气中染毒；PM组：经染毒后,经尾静脉注射1×106BMD-MSCs 1ml;KM组：干细胞对照组经尾静脉注射1×106 BMD-MSCs 1ml;造模后于6、24、48小时处死动物收取标本。2.腹主动脉采血测血气分析,余离心留取上清后转入-80℃保存待测。取右肺下叶测定肺湿重及干重,右肺中叶立即放入液氮中冷冻,后转入-80℃冰箱中保存待测。取部分右肺上叶放入多聚甲醛中固定,用于组织形态学观察,后通过气管往肺叶内注入适量OCT稀释液,收集标本制成冰冻切片,并在荧光显微镜下观察携带GFP的干细胞。左肺行支气管肺泡灌洗留取灌洗液待测。分别测定肺湿干比,血清及肺泡灌洗液TNF-α及IL-10及肺组织AQP5及SPC的mRNA表达量。3.统计学分析：采用SPSS22.0统计软件对数据进行处理,计量资料数据以均值±标准差(x±s)表示。不同处理组间资料均数比较采用析因设计资料的方差分析。各组间同一时间点之间的比较及组内不同时间点间的比较采用完全随机资料的方差分析(one-way ANOVA法),以P<0.05判断差异有显著性。结果：一般情况：PH组及PM组大鼠染毒后出现呼吸急促,肢体无力,嗜睡等表现,但PM组症状较轻及恢复较快。W/D：PH组较K组的湿干比明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),PM组较PH组的湿干比下降,差异有统计学意义(P<0.05)。血气分析：PH组较K组的氧分压低,差异有统计学意义(P<0.05)；PM组较PH组的氧分压高,差异有统计学意义(P<0.05)。病理学：K组及KM组：肺组织结构清晰,肺泡腔内无炎性细胞浸润,肺泡壁薄,间质血管无扩张,支气管粘膜上皮完整。PH组：肺泡结构广泛被破坏,肺间质轻度水肿,肺泡腔内有较多量渗出的红细胞及炎性细胞浸润,后逐渐恢复。PM组：少部分肺泡结构破坏,余肺组织及间质结构尚完整,部分肺泡间隔稍增宽,可见轻度肺间质水肿,有少量红细胞及中性粒细胞浸润。归巢：PM组及KM组可见携带GFP的干细胞,但PM组明显多于KM组。血清及BALF:1) TNF-α; PH组较K组的TNF-α浓度明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),PM组较PH组的TNF-α浓度低,差异有统计学意义(P<0.05)。2)IL-10：PH组较K组的IL-10浓度明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)；PM组较PH组的IL-10浓度高,差异有统计学意义(P<0.05)。肺组织肺泡上皮细胞标志物mRNA含量：PH组及PM组的AQP5及SPC的mRNA含量在6小时开始下降,24小时下降至最低点,后逐渐上升,PM与PH组间相同时间点及组内不同时间点的差异有统计学意义(P<0.05)。结论：经尾静脉注射BMD-MSCs后可以使大鼠的血液及肺泡灌洗液中抗炎因子IL-10升高、促炎因子TNF-α下降以及减缓SPC及AQP5下降,因此认BMD-MSCs对光气致急性肺损伤大鼠肺具有保护作用。