解旋酶是一类能够催化核苷三磷酸（ATP）水解所释放的化学能来完成在DNA或RNA链上移动,并解开核酸双链的一类分子马达蛋白。生物体内的很多生命活动都需要解旋酶的参与。DHX36是SF2中DEAH/RHA亚家族中的成员,是一种能够G4底物具有高亲和力的RNA解旋酶,近几年得到广泛的关注,并取得很多结构方面的成果,这些成果为DHX36解旋酶的解旋机理和酶学特征奠定了重要的意义。G4结构是由富含连续的鸟嘌呤（Guanine）核酸序列形成的四链螺旋结构,G4的形成和稳定通常对金属离子具有依赖性。这种序列广泛的存在生物体当中,参与DNA的复制、转录、翻译等活动,G4结构的不恰当形成,会带来一系列的疾病。而部分以G4结构为特异底物的解旋酶是解旋G4链体结构的重要参与者,因此研究此类解旋酶与G4的相互作用显得尤为重要。本研究以牛DHX36（Bos taurus DHX36）解旋酶为材料,利用蛋白原核表达系统获得高纯度的BtDHX36蛋白及其突变体蛋白,利用荧光各向异性以及Stop flow等技术对BtDHX36蛋白及其突变体蛋白对TelG4的亲和活性和解旋活性差异分析。为深入研究DEAH/RHA亚家族酶学活性提供参考,主要获得以下成果:（1）将BtDHX36解旋酶基因的内部多余的Eco R I酶切位点突变回正常基因,并重组构建入p ET15b-sumo载体中,形成重组载体p ET15b-sumo-DHX36,经鉴定正确后,转入表达菌株BL21（DE3）中进行可溶性表达。经Ni-NTA亲和层析柱洗脱,sumo酶切,Q柱洗脱及SP柱洗脱可得到纯度>95%的目的蛋白。分子量大小为108 k Da。（2）利用荧光各向异性法对KCl、Mg Cl₂浓度、p H值及反应温度等作为参考因素,摸索BtDHX36解旋酶体外最佳底物结合条件时,得到BtDHX36解旋酶体外最佳底物结合条件为:50 mmol/L KCl、2 mmol/L Mg Cl₂、20 mmol/L Tris-HC l=7.5、反应温度37℃,在此条件下发现BtDHX36对Poly（GT）的序列具有较高亲和力。在BtDHX36和Poly（GT）的复合结晶后,筛选出可以结晶的条件。（3）首先扩增BtDHX36基因片段,通过Overlap PCR引入点突变,构建突变体的重组表达载体,经过鉴定正确,进行表达纯化,可得到纯度>95%的突变体蛋白。（4）利用荧光各向异性分析位点突变对TelG4结合活性的影响。结果表明N端突变体BtDHX36^R63AI65A、BtDHX36^Y69A、BtDHX36^K76AN77AK78A与野生型蛋白相差不大,OB结构域位点Y862的突变降低了蛋白对TelG4的结合比例。（5）利用快速停留荧光共振能量转移技术测定BtDHX36解旋酶突变体蛋白对TelG4-16T的解旋活性。结果表明OB结构域的Y862位点的突变对解旋无明显影响,说明该位点可能不直接参与BtDHX36解旋活动。N端位点R63、I65、Y69对解旋有较明显影响,突变后降低了蛋白解旋TelG4底物的比例和速率。说明这些位点是参与TelG4解旋的重要位点。