论文部分内容阅读
目的:探讨蛋白磷酸酶2A(PP2A)特异性抑制剂冈田酸(OA)及激动剂D-赤型神经胺(DES)作用于人子宫内膜癌细胞系(Ishikawa细胞),其对细胞水平PP2A表达情况及细胞功能的影响。方法:1.常规培养Ishikawa细胞,取对数生长期的细胞,使用PP2A激动剂(DES浓度分别为0nmol/l,5nmol/l,10nmol/l,20nmol/l)及PP2A抑制剂(OA浓度分别为0nmol/l,10nmol/l,20nmol/l,40nmol/l)分别处理12h、24h,48h后,加入CCK8溶液检测OA及DES对细胞的增殖及抑制情况;2.进一步选取其中对Ishikawa细胞增殖率和抑制率最明显的浓度和时间点作为实验组,并设置对照组,其中选择DES的浓度为20nmol/l,选择OA的浓度为40nmol/l,于48h行划痕试验检测细胞的迁移能力,Treanswell试验检测细胞的侵袭能力,流式细胞学测细胞周期,Western Blot法检测细胞水平PP2A的表达变化情况。结果:1.DES总体上显示出了对Ishikswa细胞的抑制作用;行两两比较,发现随着浓度和时间的增加,其抑制率显示出了时间-剂量依赖性;其中以DES浓度为20nM、时间为48h时,其抑制作用最明显。OA总体上显示出了对Ishikswa细胞的促增殖作用,行两两比较,随着时间和浓度的增加,其增殖率显示出了时间-剂量依赖性;其中以OA浓度为40nM、时间为48h时,其增殖作用最明显。2.浓度为40nmol/l的OA及20nmol/l的DES作用于Ishikawa细胞48h时,划痕试验显示:与对照组相比,OA能明显促进细胞迁移,DES能明显抑制细胞的迁移,差异均有统计学意义。Treanswell试验显示:与对照组相比,OA为能明显促进细胞侵袭,DES能明显抑制细胞的侵袭,差异均有统计学意义。3.浓度为40nmol/l的OA及20nmol/l的DES作用于Ishikawa细胞48h时,流式细胞学周期试验显示:OA组细胞的增殖活力较对照组增强,差异有统计学意义,DES组细胞的增殖活力较对照组下降,差异有统计学意义;4.浓度为40nmol/l的OA及20nmol/l的DES作用于细胞48h时,Western Blot分析结果显示,与对照组比较,OA能抑制细胞水平PP2A蛋白的表达,DES能促进细胞水平PP2A蛋白的表达。结论:1.OA及DES可以改变人子宫内膜癌Ishikawa细胞PP2A的表达,其中OA抑制PP2A的表达,DES促进PP2A的表达。2.OA及DES作为常用的外源性PP2A的抑制剂和激动剂,通过对细胞水平PP2A的表达的改变,从而影响了Ishikawa细胞的生物学功能,其中包括细胞增殖、迁移、侵袭和细胞周期。