【摘 要】
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类钙调磷酸酶B蛋白(calcineurin B-Like protein,CBLs)是植物中研究比较深入的Ca2+传感器之一。CBL在Ca2+信号的转导过程中,还要与一类依赖Ca2+的蛋白激酶发生互作,这类蛋白激酶被称为CBL互作蛋白激酶(CBL-interacting protein kinase,CIPK),CIPKs普遍参与植物的多种逆境胁迫的调节过程。目前,对于CIPKs基因的研究大多数集
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类钙调磷酸酶B蛋白(calcineurin B-Like protein,CBLs)是植物中研究比较深入的Ca2+传感器之一。CBL在Ca2+信号的转导过程中,还要与一类依赖Ca2+的蛋白激酶发生互作,这类蛋白激酶被称为CBL互作蛋白激酶(CBL-interacting protein kinase,CIPK),CIPKs普遍参与植物的多种逆境胁迫的调节过程。目前,对于CIPKs基因的研究大多数集中在拟南芥(Arabidopsis thaliana)、水稻(Oryza sativa L)、玉米(Zea mays)、小麦(Triticum aestivum)中,而狗牙根CIPK的研究尚未见报道。本文以狗牙根CIPK5作为研究对象,通过上调Cd CIPK5基因的表达,分析Cd CIPK5的功能,主要的研究结果如下:在本实验室已克隆Cd CIPK5基因的ORF基础上,对Cd CIPK5蛋白序列进行了分析:Cd CIPK5编码456个氨基酸,具有两个保守结构域,属于亲水性蛋白,无核膜信号肽。聚类分析的结果表明,Cd CIPK5与Os CIPK5和At CIPK6亲缘关系最近。q PCR分析的结果表明,Cd CIPK5在野生型狗牙根的根、茎、叶均有表达,其中叶中表达量最高。Cd CIPK5的表达受盐、冷、干旱胁迫和ABA的诱导,125 m M Na Cl胁迫下,2 h表达量最高,4℃冷胁迫下,2 h表达量最高,脱水胁迫6 h表达量最高,100 m M ABA胁迫下,6 h表达量最高。克隆Cd CIPK5基因启动子,构建PCd CIPK5驱动GUS表达载体转化水稻后,GUS染色结果进一步验证了Cd CIPK5在根和叶中都有表达,且其表达受盐、冷、干旱胁迫和ABA的诱导。过量表达Cd CIPK5的转基因水稻的株高和结实率与野生型相比没有显著差异。对过表达Cd CIPK5的转基因水稻进行盐处理后其相对含水量和最大光化学效率Fv/Fm显著高于野生型。对过表达Cd CIPK5的转基因水稻进行抗冷性分析,其相对电导率和最大光化学效率Fv/Fm与野生型相比没有显著差异。对过表达Cd CIPK5的转基因水稻进行抗旱性分析,其相对含水量和相对电导率与野生型相比没有显著差异。经不同浓度ABA处理,过量表达Cd CIPK5转基因水稻种子的根长和萌发率受ABA抑制较野生型明显。以上结果表明过表达Cd CIPK5提高了水稻的耐盐性和对外源ABA的敏感性,而水稻的生长、耐寒性和耐旱性与野生型相比没有显著差异。
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