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木葡聚糖内糖基转移酶/水解酶(Xyloglucan endotransglycosylase/hydrolase,XTH)是一种重要的细胞壁修饰酶，在植物的细胞生长和生命活动中起着关键的作用。为研究观赏植物中XTH基因结构以及在花瓣生长发育过程中的表达特征及功能，本研究以菊花、孔雀草和大丽花等三种菊科植物为研究对象，从花瓣中提取总RNA，克隆了XTH编码基因的cDNA序列。在此基础上，进一步研究了大丽花XTH基因（DpXTH）的结构及表达特征，取得了如下试验结果。1.利用RT-PCR技术，克隆了菊花和孔雀草花瓣XTH基因的cDNA序列，分别命名为CmXTH (Genbank:HM752243)和TpXTH (Genbank: JN164663)，两者开放读码框的核苷酸序列为882bp，编码293个氨基酸残基，其中包含了XTH的活性位点DELDFEFLG。Blast分析结果表明，CmXTH和TpXTH与同为菊科植物的大丽花、非洲菊的同源性最高；通过聚类分析发现，CmXTH和TpXTH基因编码的多肽与拟南芥XTH家族中第一组的At-XTH7聚类到同一组，推测CmXTH和TpXTH具有木葡聚糖转糖苷酶和木葡聚糖水解酶两种活性。2.利用3′RACE技术，获得了大丽花花瓣DpXTH1基因的3′末端序列（Genbank: JN389794），克隆片段序列长为542bp，其中非编码区长190bp。以分段PCR法扩增得到了1条大丽花XTH基因组DNA序列，序列长1293bp，包含4个外显子与3个内含子，其外显子区域与DpXTH1mRNA序列的相似性达93.52%，两者所编码的氨基酸序列同源性为93.49%，推测克隆的XTH基因组DNA序列为DpXTH1的同源基因，故命名为DpXTH2（Submission1523046）。通过与拟南芥XTH基因比对分析，发现DpXTH1与拟南芥At-XTH7同源性较高，DpXTH2外显子序列与At-XTH6同源性较高，而At-XTH7和At-XTH6同属于拟南芥第一组XTH基因，因而推测DpXTH1和DpXTH2编码的蛋白也具有木葡聚糖转糖苷酶和木葡聚糖水解酶两种活性。以基因组DNA为模板，使用hi TAIL-PCR技术，分离获得了DpXTH2基因起始密码子上游长为125bp的部分序列。根据上述三方面试验结果，初步探明了大丽花花瓣DpXTH基因的结构特征。3.分别以β-actin、GAPDH和18S rRNA为内参基因，使用半定量RT-PCR技术，检测了DpXTH1在大丽花花瓣生长发育过程中的表达变化。以β-actin和GAPDH为内参基因的结果显示，在花瓣生长发育的整个过程中，DpXTH1的表达量持续增加，表明DpXTH1可能不仅与花瓣的生长有关，而且与花瓣的衰老也有密切关系。另一方面，以18S rRNA为内参基因的试验结果与此有所不同，说明18SrRNA作为内参基因并不适用于大丽花花瓣发育相关基因表达的检测。