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目的:①构建靶向阻断Ⅲ型PI3K信号转导通路的小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)重组质粒,包装重组腺病毒PI3K(III)-RNAi-AD;②研究siRNA阻断Ⅲ型PI3K信号转导通路后对人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡和自噬的影响。方法:①选择针对人Ⅲ型PI3K信号转导通路mRNA的特异性siRNA靶序列,构建靶向PI3KC3基因siRNA干扰的重组质粒,并采用基因测序法以确保siRNA干扰序列已正确插入载体中;将表达siRNA的穿梭质粒与携带了腺病毒大部分基因组的辅助包装质粒共转染HEK293细胞,利用AdMax?腺病毒包装系统制备重组腺病毒包装PI3K(III)-RNAi-AD;②PI3K(III)-RNAi-AD转染胃癌SGC7901细胞,siRNA阻断Ⅲ型PI3K信号转导通路后,采用MTT法测定对SGC7901细胞生长的抑制作用,应用流式细胞技术JC-1法检测对SGC7901细胞线粒体膜电位的影响,应用MDC荧光染色法观察自噬的发生, Western blot测定自噬特异性蛋白微管相关蛋白1轻链3 (microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)表达,计算LC3II/LC3I比值反映自噬水平。结果:①成功构建的特异性阻断Ⅲ型PI3K信号转导通路的PI3KC3-siRNA质粒,经基因测序证实siRNA靶序列已正确插入质粒载体;包装的重组腺病毒PI3K(III)-RNAi-AD及对照腺病毒NC-RNAi-GFP-AD滴度分别为2.0×1011 pfu/L,和1.8×1011 pfu/L;腺病毒对胃癌SGC7901细胞感染复数(multiple of infection,MOI)为30时转染效果最好。②PI3K(III)-RNAi-AD转染胃癌SGC7901细胞后胃癌SGC7901细胞的增殖明显受到抑制,实验组24h、48h、72h的吸光度分别为0.30±2.00%、0.33±1.77%、0.42±2.36%,对照组24h、48h、72h的吸光度分别为0.40±4.25%、0.58±3.29%、0.85±3.25% (p<0.05),计算24h、48h、72h抑制率为25.31%±7.30%、43.71%±4.35%、50.89%±2.84%;流式细胞术检测结果显示实验组绿色荧光的细胞占总细胞的比值24h、48h、72h分别为19.6%±2.65%、35.7%±6.62%、50.4%±7.39%,对照组72h为12.3%±2.17% (p<0.05),绿色荧光的细胞数量占总细胞数的比值越大,线粒体膜电位就越低;MDC荧光染色观察结果显示:实验组随着时间延长(6h、12h、24h)自噬囊泡逐渐减少,对照组24h自噬囊泡比实验组各组都多;LC3的表达实验组6h、12h、24h LC3II/LC3I比值分别为0.876±7.51%、0.356±2.99%、0.145±1.98%,而对照组的24h LC3II/LC3I比值为1.267±4.93% (p<0.05)。结论:①成功构建了特异性阻断Ⅲ型PI3K信号转导通路的PI3KC3-siRNA质粒,包装了重组腺病毒PI3K(III)-RNAi-AD及对照腺病毒NC-RNAi-GFP-AD。②SiRNA阻断Ⅲ型PI3K信号转导通路后胃癌SGC7901细胞的增殖明显受抑,自噬水平明显下调,细胞凋亡明显增强。