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目的:肥胖症已成为危害全球人类健康的重要疾病,与2型糖尿病、高血压、心脑血管疾病、脂代谢异常、胰岛素抵抗等多种疾病的发生、发展密切相关,并可引起其他一些相关疾病如非酒精性肝病、哮喘以及关节炎等的发生。肥胖症形成的中心环节是脂肪细胞中脂质的过度积聚,多种因素参与了此过程,但是具体形成机制还不完全清楚,而关于该方面的研究,对肥胖症的防治有重要意义。锌α2糖蛋白（zinc-α2-glycoprotein,ZAG）是最近新发现的一个脂肪细胞因子,可以促进肿瘤恶液质患者的脂肪分解,增加脂肪利用。但是ZAG与肥胖症患者的脂肪堆积是否有关系,目前尚未有相关报道。本研究拟用基因表达技术,观察ZAG基因过表达对肥胖小鼠体重、内脏脂肪含量、糖脂代谢等的影响以及在脂肪代谢中起关键作用的脂肪酸合成酶（Fatty acid synthase,FAS）、激素敏感性脂肪酶（Hormone sensitive lipase,HSL）mRNA表达的变化,同时观察正常人和肥胖患者减肥前后血清中ZAG蛋白水平的变化。通过以上这些观察探讨ZAG与肥胖症的关系。方法:1小鼠ZAG蛋白表达质粒pcDNA3.1（-）-mZAG的构建:1.1 mZAG cDNA插入片段的扩增:从小鼠肝脏中提取总RNA,应用RT-PCR技术,获得小鼠ZAG cDNA全序列的大量扩增产物,并利用引物在其两端引入酶切位点。1.2载体片段的获得:将本室保存的人ZAG蛋白表达质粒pcDNA3.1（-）-hZAG大量拷贝,经EcoRⅤ、HindⅢ双酶切后,获得大量载体片段。1.3应用T4DNA连接酶,将经EcoRⅤ、HindⅢ双酶切的小鼠ZAG cDNA全序列扩增产物与载体片段进行连接,获得小鼠ZAG表达质粒pcDNA3.1（-）-mZAG。2 pcDNA3.1（-）-mZAG表达质粒的体外鉴定:应用阳离子脂质体转染方法将pcDNA3.1（-）-mZAG质粒转染小鼠3T3-L1前脂肪细胞,40h后收集培养液,应用western-blotting方法观察ZAG蛋白的表达情况。3采用高脂饲料诱导的肥胖小鼠模型,观察ZAG过表达对小鼠体重、内脏脂肪重量及糖脂代谢的影响:选择6周龄的雄性昆明小鼠45只,分为5组:普通饲料组、高脂饲料组、ZAG过表达组、空白质粒组、曲美组,每组9只。除普通饲料组外,其余四组均用高脂饲料喂养。5周后肥胖小鼠模型建立,然后进行2周干预试验。ZAG过表达组用pcDNA3.1（-）-mZAG质粒25μg与lipofectamine2000脂质体40ul混合后给予小鼠尾静脉注射,隔日1次,共注射2周,空白质粒组以pcDNA3.1（+）质粒进行注射,曲美组每天以曲美10mg/kg体重/d灌胃。干预两周后处死小鼠,观察小鼠摄食量、体重、附睾周围脂肪重量、血糖、血脂等指标。4小鼠附睾周围脂肪组织FAS、HSL mRNA的表达:从动物实验中获得的小鼠附睾周围脂肪组织中提取总RNA,应用RT-PCR技术,检测FAS、HSLmRNA的表达。5正常人和肥胖患者减肥前后血清中ZAG蛋白表达水平的比较:正常人19人（男11人,女8人）,平均BMI为21.6。肥胖患者31例（男14人,女17人）,平均BMI为32.6,13例肥胖患者减肥后,BMI平均为29.6,减重5-10%,平均减重7.6kg,较减肥前显著降低（P＜0.05）。应用western-blotting技术,利用抗人ZAG的单克隆抗体,对血清中的ZAG的量进行比较,并以同组标本的血清β-actin的量作内参照,观察ZAG在不同BMl人群中的表达情况。结果:1成功克隆小鼠ZAG cDNA全序列,并将其与pcDNA3.1（-）载体片段连接,构建成pcDNA3.1（-）-mZAG表达质粒。2在体外培养的小鼠3T3-L1前脂肪细胞系中,证实ZAG表达质粒pcDNA3.1（-）-mZAG可以在脂肪细胞中良好表达。3高脂饲料组、空白质粒组、曲美组小鼠的血清ZAG水平分别为0.51±0.10、0.54±0.08、0.55±0.05,没有显著差别（P均＞0.05）,但与普通饲料组（0.75±0.07）相比,均明显降低（P均＜0.01）。ZAG过表达组小鼠的血清ZAG水平为1.01±0.16,显著高于普通饲料组及高脂饲料组（P均＜0.001）,提示pcDNA3.1（-）-mZAG表达质粒确实能在小鼠体内表达ZAG蛋白。4在2周的干预试验中,高脂饲料组、ZAG过表达组每只小鼠的摄食量平均分别为115.4±13.5g、115.8±7.5g,两组间无差异（P=0.82）,均明显高于普通饲料组（90.1±9.8g）（P均＜0.001）。高脂饲料组每只小鼠体重增加3.7±0.9g,明显高于普通饲料组（2.7±0.7g）（P＜0.01）。ZAG过表达组小鼠的总体重增加3.0±0.5g,明显低于高脂饲料组（P＜0.001）,与普通饲料组相比无差别（P=0.23）。高脂饲料组小鼠的内脏脂肪占体重比例为2.22±0.48%,显著高于普通饲料组（P＜0.05）。ZAG过表达组小鼠的内脏脂肪占体重比例平均1.16±0.10%,明显低于高脂饲料组小鼠（P＜0.001）及普通饲料组（P＜0.05）。高脂饲料组小鼠的空腹血糖为10.87±1.77 mmol/L,是普通饲料组的1.24倍（P＜0.05）。ZAG过表达组小鼠的空腹血糖水平平均9.13±1.00 mmol/L,为高脂饲料组小鼠的84%（P＜0.05）,与普通饲料组无差异（P=0.55）。高脂饲料组小鼠的低密度脂蛋白为1.10±0.24 mmol/L,明显高于普通饲料组（0.59±0.44 mmol/L）,为普通饲料组的1.86倍（P＜0.001）。ZAG过表达组小鼠的血清低密度脂蛋白水平平均0.78±0.17 mmol/L,为高脂饲料组的71%（P＜0.05）,与普通饲料组相比,无明显差异（P=0.49）。5高脂饲料组小鼠内脏脂肪组织FAS mRNA为4.10±0.64,明显高于普通饲料组（2.67±0.46）,为后者的1.54倍（P＜0.001）。ZAG过表达组小鼠脂肪组织FAS mRNA（1.54±0.39）表达显著降低,为普通饲料组的58%,为高脂饲料组的38%（P均＜0.001）。高脂饲料组小鼠内脏脂肪组织HSL mRNA表达为1.18±0.19,明显低于普通饲料组（1.98±0.25）,为后者的60%（P＜0.01）。ZAG过表达组小鼠脂肪组织HSL mRNA为4.39±0.95,较普通饲料组和高脂饲料组均明显增加,分别为普通饲料组和高脂饲料组的2.22倍和3.72倍（P均＜0.001）。6正常人血清ZAG蛋白水平平均为0.74±0.10,肥胖患者血清ZAG蛋白水平显著低于正常人（P＜0.05）。减肥后,ZAG蛋白水平较减肥前有所增加（P＜0.05）,但仍明显低于正常人水平（P＜0.05）。正常人、肥胖患者及肥胖患者减肥后,血清ZAG蛋白水平与BMI均不具有相关关系（r分别为0.16、0.34、0.25,P均＞0.05）。结论:1成功构建了pcDNA3.1（-）-mZAG表达质粒,在体内、体外均能良好表达鼠源ZAG蛋白,是研究ZAG作用的一种有效工具。2 ZAG可使高脂诱导的肥胖小鼠,体重增加减少,内脏脂肪含量减少,血清低密度脂蛋白降低,表明ZAG具有减轻体重,减少脂肪积聚的作用,有一定的减肥效果。3 ZAG可能通过作用于小鼠脂肪组织FAS和HSL两个靶点,抑制脂肪合成,促进脂肪分解,从而减轻体重。4 ZAG在肥胖患者中表达减少,减肥后表达有所增加,可能与肥胖症有一定关系。