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目的:本研究旨在观察中药降脂宁提取物与西药阿托伐他汀分别及联合干预对高脂钙化模型大鼠的影响,探讨其可能的作用途径及对其机制做初步探究。 方法:将八周龄雄性健康Wistar大鼠56只随机分为:正常对照组(CON)、高脂组(HLP)、钙化组(VDN)、高脂钙化组(HLP+VDN)、降脂宁组(JZN)、阿托伐他汀组(AS)和降脂宁+阿托伐他汀组简称复药组(JZN+AS),共7组,每组8只。用高脂饲料制备高脂血症模型;肌注维生素D3加尼古丁灌胃法诱导血管钙化模型;两方法联合制备高脂血症合并血管钙化模型;分别根据大鼠体重给予药物降脂宁提取物、阿托伐他汀和降脂宁提取物+阿托伐他汀干预高脂钙化模型大鼠。各组大鼠共同饲养16周后,检测血脂四项、血清碱性磷酸(ALP)活性和钙含量;采用原子吸收分光光度法对血管指标进行测定:钙含量、ALP活性、总超氧化物歧化酶(SOD)活力、一氧化氮(NO)含量和丙二醛(MDA)含量;用免疫组化法检测骨桥蛋白(OPN)在大鼠血管中的表达,半定量RT-PCR测定组织细胞中核结合因子cbfα-1(Runx2)mRNA的表达变化;Western blot法检测组织细胞核结合因子cbfα-1(Runx2)和凋亡因子Caspase-3蛋白表达;用原位末端标记法(TUNEL)检测平滑肌细胞凋亡情况;另外对主动脉进行HE和Von Kossa染色。 结果: 1.HLP+VDN组和HLP组与CON组比较血清TG和TC均明显升高,用药组较HLP+VDN组均显著降低(P<0.01)。JZN+AS组血清LDL较JZN组显著降低(P<0.01)。 2.VDN组和HLP+VDN组与CON组比较血管总钙含量均升高(P<0.05)。JZN组、JZN+AS组和AS组与HLP+VDN组比较血管总钙含量均降低(P<0.01,P<0.05,P>0.05)。VDN组和HLP+VDN组血管ALP活性与CON组相比均升高(P<0.05)。JZN组、JZN+AS组血管ALP活性较HLP+VDN显著降低(P<0.01);AS组较HLP+VDN组也有降低,但无统计学意义(P>0.05)。 3.HLP组和HLP+VDN组血管SOD活力较CON组均明显降低(P<0.05,P<0.01)。JZN组血管SOD活力较HLP+VDN组有所升高(P<0.05)。VDN组、HLP组和HLP+VDN组与CON组相比血管内NO含量均有所降低(P>0.05、P<0.05、P<0.01)。JZN组、AS组和JZN+AS组血管NO含量较HLP+VDN组均有升高(P>0.05、P<0.05、P<0.05)。VDN组、HLP组和HLP+VDN组血管MDA含量较CON组均显著升高(P<0.05、P<0.01、P<0.01)。JZN组、AS组和JZN+AS组较HLP+VDN组血管MDA含量显著降低(P<0.05,P<0.05,P<0.01)。JZN+AS组与JZN组与AS组比较显著降低(P<0.01)。 4.qRT-PCR结果显示:VDN组、HLP组和VDN+HLP组与CON组比较Runx2mRNA表达均显著升高(P<0.01)。JZN组、AS组和JZN+AS组与VDN组和HLP+VDN组分别相比较Runx2 mRNA表达均显著降低(P<0.01)。 5.Western Blot结果显示:Runx2在CON组中表达较少,在VDN组、HLP组和HLP+VDN组Runx2蛋白表达较CON组均显著增加(P<0.01),HLP+VDN组较VDN组和HLP组表达均显著增加(P<0.01)。JZN组、AS组和JZN+AS组较HLP+VDN组Runx2的蛋白表达均显著降低(P<0.01)。Caspase-3蛋白表达结果显示:HLP组和HLP+VDN组较CON组显著增加(P<0.01)。HLP+VDN组较VDN组和HLP组Caspase-3蛋白表达均明显增加(P<0.01);JZN组、AS组和JZN+AS组较HLP+VDN组Caspase-3蛋白表达均显著降低(P<0.01)。 6.TUNEL结果显示:与CON组相比VDN组、HLP组和HLP+VDN组动脉血管平滑肌细胞核固缩,凋亡小体数增多且边缘化,凋亡细胞数显著增高(P<0.01);JZN组、AS组和JZN+AS组与HLP+VDN组相比均显著有降低(P<0.05、P<0.01、P<0.01)。 7.主动脉HE染色在HLP组和VDN+HLP组均可见内膜损伤,VDN组和VDN+HLP组可见平滑肌弹性纤维增粗。主动脉Von Kossa染色显示VDN组和VDN+HLP组可见中膜钙沉积。免疫组织化学染色结果显示中膜钙盐沉积部位骨桥蛋白(OPN)的表达明显增强;且JZN组、AS组和JZN+AS组较VDN组和VDN+HLP组钙化沉积均有减少,这些部位骨桥蛋白(OPN)的表达减弱(P<0.01)。 结论:本研究结果表明降脂宁提取物和阿托伐他汀均有较好降脂作用,且两者结合降脂效果更优。降脂宁提取物和复药组均能降低血管钙含量,具有一定的抑制血管钙化作用,其机制可能与保护血管内皮细胞功能,平衡机体氧化/抗氧化反应,下调Runx2的表达,降低ALP活性抑制平滑肌细胞向成骨样细胞转化和下调凋亡因子Caspase-3的表达,抑制血管平滑肌细胞凋亡密切相关,其确切机制有待进一步的探究。