1背景及目的肺癌是全球死亡率最高的恶性肿瘤，估计到2030年，全球将有830万人死于吸烟相关性疾病，其中肺癌占3.1％。肺癌中超过80%为非小细胞肺癌(NSCLC)，5年存活率不超过10%。肺癌的高发病率和低存活率，研究其发病机制将有助于防止疾病发生发展。全球肿瘤研究者共识：开展积极有效的筛查、早期诊断、早期治疗、早期干预以降低肺癌的发病率、死亡率和提高治疗率。肿瘤的发生是环境因素和遗传因素共同作用的结果，是一个受多因素影响、涉及多基因、表现多阶段的十分复杂的过程。肿瘤和凋亡关系密切，肿瘤发生的一个重要原因是基因水平上诱导凋亡基因失活，抑制凋亡基因过度表达。有研究表明，细胞凋亡相关基因改变与肿瘤预后有一定关系。诱导肿瘤细胞凋亡是肿瘤治疗的重要策略。随着分子生物学技术的不断发展和完善，对肿瘤发病机制的认识日益深化，基因治疗已成为继化疗、放疗、手术等治疗后极有发展前景的一种高效、特异、靶向的治疗方法。国内外文献对凋亡基因c-myc已有研究，但caspase-8在恶性肿瘤细胞中的表达及其与细胞调亡关系的研究相对尚少，在NSCLC中的研究甚少。本文主要研究c-myc、caspase-8在NSCLC的表达及临床意义，研究两者在NSCLC中表达的相互关系。c-myc与caspase-8联合研究为临床诊断和治疗提供实验依据。2对象和方法2.1研究对象随机收集郑州大学第一附属医院病理科2010-2012年胸外科送检的肺癌标本50例，年龄在44-77岁之间，鳞癌27例，腺癌23例，所有患者手术前未进行放化疗等其他治疗，病理诊断为NSCLC，癌组织分期按照美国联合癌症分类委员会（AJCC）和国际抗癌联盟（UICC）制定的分期标准[1]。选取NSCLC组织边缘3cm以外的经病理证实的20例正常肺组织为对照组，所有标本均被石蜡包埋，由病理科专业人员切片，NSCLC组织及正常肺组织各切3张。2.2实验方法检测c-myc、caspase-8在NSCLC组织及正常组织中的表达采用免疫组织化学法（S-P法），检测c-myc、caspase-8在NSCLC组织及正常组织中的细胞凋亡采用TUNEL法。2.3结果判定c-myc、caspase-8阳性标准：c-myc在肺鳞癌中主要表达在细胞核，肺腺癌中主要表达在细胞浆，阳性表达均表现为棕黄色颗粒。caspase-8的染色为细胞质和（或）细胞核出现棕黄色颗粒。c-myc、caspase-8在NSCLC中的表达从两方面进行定量判断：①阳性染色程度：无染色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。②染色细胞百分率：光镜（400倍）下每个视野计数100个细胞，每张切片随机挑选10个视野，计算阳性细胞数占总癌细胞数百分比，＜10%为0分，10%-25%为1分，26%-50%为2分，≥51%为3分[2]。两个定量数字相加，总分值小于4为阴性，大于等于4为阳性。细胞凋亡：凋亡细胞经TUNEL法处理后，运用400倍光学显微镜，结合凋亡细胞染成棕黄色综合判断，计数每1000个肿瘤细胞中凋亡细胞的个数，进行统计学分析[3]。凋亡细胞指数（AI）=调亡细胞数/计数总细胞数。2.4统计学处理本实验所有统计均应用SPSS17.0软件进行处理，c-myc、caspase-8的表达及其与NSCLC临床病理特征的关系采用配对四格表的卡方检验。c-myc与caspase-8在NSCLC中表达的相关性应用配对资料的相关性分析，c-myc、caspase-8与凋亡的关系采用直线相关性分析。α=0.05为检验水准。3结果3.1c-myc在NSCLC中的表达及其与临床病理特征的关系c-myc经免疫组化后，细胞胞质和（或）细胞胞核被染成棕黄色，肺癌组织50例，阳性率为60.0%（30/50），正常肺组织20例，阳性率为20%（4/20），两者差异有统计学意义（χ2=9.150，P=0.002），但c-myc在癌组织的染色均要深于正常组织。结果显示，c-myc在腺癌中的表达率（78.3%）高于在鳞癌中的表达率（44.4%），差异有统计学意义（χ2=5.918，P=0.015）。高分化组织的阳性表达率（88.9%）要高于中分化（65.4%）和低分化（33.3%），三者之间差异有统计学意义（χ2=7.888，P=0.019）。淋巴结转移者阳性率（75%）较无淋巴结转移者的阳性率（46.2%）高，差异有统计学意义（χ2=4.327，P=0.038）。TNM Ⅲ期和Ⅳ期阳性率（84.2%）要高于Ⅰ期和Ⅱ期阳性率（45.1%），差异有统计学意义（χ2=7.484，P=0.006）。c-myc的表达与性别、年龄、吸烟、肿瘤大小、肿瘤位置、胸腔积液无明显关系（P>0.05）。3.2caspase-8在NSCLC中的表达及其与临床病理特征的关系caspase-8在NSCLC中细胞核和（或）细胞质中经免疫组化被染成棕黄色，肺癌组织50例，阳性率为62.0%(31/50)，正常肺组织20例，阳性率为65%(13/20)，两者差异无统计学意义（χ2=0.055，P=0.814）。淋巴结转移阳性率（79.2%）较无淋巴结转移者阳性率（46.2%）高，差异有统计学意义（χ2=5.773，P=0.016）。TNM Ⅲ期和Ⅳ期阳性率（84.2%）要高于Ⅰ期和Ⅱ期阳性率（48.4%），差异有统计学意义（χ2=6.417，P=0.011）。caspase-8在NSCLC中的表达与性别、年龄、病理类型、高中低分化、吸烟、肿瘤大小、肿瘤位置、胸腔积液无明显关系（P>0.05）。3.3NSCLC组织中c-myc与caspase-8表达的关联性分析c-myc为原癌基因，参与细胞凋亡，caspase-8为参与细胞凋亡蛋白，和其他凋亡相关基因共同介导着肺癌细胞凋亡。实验结果示NSCLC组织中，c-myc阳性30例，caspase-8阳性31例，两者共同表达阳性19例，c-myc阴性20例，caspase-8阴性19例，两者共同表达阴性8例，应用配对资料的相关性分析示，两种因子间无明显相关性（r=0.034，P=0.812）。3.4ｃ-myc、caspase-8与凋亡之间的关系c-myc与细胞凋亡呈负相关(r=-0.784，P=0.000)，caspase-8与细胞凋亡呈正相关(r=0.885，P=0.000)。4结论1．c-myc与NSCLC的发生、进展、临床分期、恶性程度关系密切。2．caspase-8与NSCLC的发展关系密切，可能预测淋巴结转移。3．下调或抑制该c-myc可能抑制NSCLC的发生进展；修复caspase-8蛋白的基因表达有望抑制NSCLC的进展。