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研究背景:子宫内膜癌（EC）是发生在子宫内膜的恶性肿瘤,是一种最常见的女性生殖道肿瘤,占20-30%。其病因和发病机制尚未完全阐明,缺乏有效的早期无创诊断方法和评估药物疗效的指标,尤其是高级别、分化差或特殊类型的EC难以治疗,预后不良。若能早期发现并确诊子宫内膜癌,将显著延长患者的生存和改善其预后,有着重要的临床意义。长非编码RNA（lnc RNA）是真核生物中的一种RNA分子,可以在表观遗传、转录和转录后水平调控基因表达,并且被确认在肿瘤发展中发挥着重要作用。阐明lnc RNA在子宫内膜癌发展中的具体机制有助于改善EC治疗,这对提高EC患者的生存率具有重要意义。LINC01220位于染色体14q24.3上,官方全称:长基因间非蛋白编码RNA1220,目前国内外尚未有LINC01220与肿瘤关系的研究报道。研究目的:我们探讨LINC01220和MAPK信号通路在EC发生发展中的作用机制、以及两者之间的调控关系。研究方法:我们从TCGA数据库下载了EC和癌旁组织的全基因组表达谱数据。用q RT-PCR检测我院30例子宫内膜癌患者的癌组织和癌旁组织中LINC01220的RNA表达量,分析LINC01220表达与EC患者临床病理特征之间的关系。在体外EC细胞株（Ishikawa和RL95-2）中用sh-LINC01220和pc DNA-MAPK11转染后,分别采用CCK-8、细胞克隆计数分析细胞增殖和细胞克隆形成能力;采用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;采用蛋白质印迹检测分析子宫内膜癌细胞株中LINC01220对MAPK11蛋白的调节作用。研究结果:1、为了探索lnc RNA在EC中的作用,首先我们下载了TCGA数据库中EC和癌旁组织的全基因组表达谱数据。发现LINC01220在EC组织中的表达明显高于癌旁组织,差异表达率最高。接着我们通过q RT-PCR检测LINC01220在确诊患者的EC和癌旁组织中的表达,结果显示,在我院手术的30例EC患者中,LINC01220在EC组织中的表达水平明显高于癌旁组织。进一步分析LINC01220表达与EC患者临床病理特征的关系,结果表明LINC01220的表达与国际妇产科联合会（FIGO）的分期相关:高级别EC患者的LINC01220表达高于低级别EC患者。与FIGO I-II期患者相比,FIGO III-IV期患者的LINC01220表达更高。这些数据表明,LINC01220可能与EC的发展密切相关。2、为了进一步探索LINC01220的生物学功能,进行了基因富集分析（GSEA）。结果表明,LINC01220的主要功能是与子宫内膜癌的凋亡功能密切相关。随后,我们构建了sh-LINC01220,并对其在三种EC细胞系（KLE、Ishikawa和RL95-2）中的转染效果进行了验证,发现LINC01220在Ishikawa和RL95-2细胞中的表达水平明显降低,这两个细胞株被选择用于以下实验。CCK-8结果显示,转染sh-LINC01220的EC细胞在培养6、24、48、72和96h后的OD值逐渐降低。同样,在敲除LINC01220后,Ishikawa和RL95-2细胞的克隆形成能力降低。此外,敲除LINC01220后EC细胞的凋亡率显著增加。这些体外细胞实验结果表明,敲除LINC01220可以抑制EC细胞的增殖和克隆形成能力,促进细胞凋亡。3、为了探索LINC01220是如何对EC细胞发生作用的,我们通过COR功能性分析评估了LINC01220表达和EC表达谱中全基因组基因之间的相关性。结果表明,LINC01220的表达量与MAPK11水平呈正相关。先前研究认为MAPK11在肿瘤中充当癌基因。在本研究中,下调LINC01220后,Ishikawa和RL95-2细胞中MAPK11蛋白水平同时下降。然后将pc DNA-MAPK11转染到Ishikawa和RL95-2细胞株中,结果显示MAPK11的蛋白水平显著上调。此外,MAPK11过表达增强EC细胞的增殖率、以及它们的细胞克隆形成能力。上述结果表明,MAPK11促进EC的进展,并受LINC01220的调控。4、为了进一步研究MAPK11和LINC01220在EC中的作用,我们同时敲除LINC01220并在EC细胞中过表达MAPK11。敲除LINC01220后降低了Ishikawa细胞的增殖能力,而这种能力在MAPK11过表达后得到增强,在RL95-2细胞中也获得了类似的结果。随后,在共转染的EC细胞中测定克隆形成能力:敲除LINC01220明显降低EC细胞的克隆形成能力,而共同转染的细胞表现出克隆能力增强。此外,还进行了矫正实验,以确定共转染EC细胞的凋亡变化。先前的实验已经发现LINC01220敲除后能刺激EC细胞凋亡。然而,在与sh-LINC01220和pc DNA-MAPK11共转染后,EC细胞的凋亡率明显降低。上述结果提示,MAPK11的过度表达逆转了sh-LINC01220对EC细胞的抑癌作用。研究结论:1、LINC01220和MAPK11在子宫内膜癌的发生发展过程中发挥致癌基因的作用,有望成为子宫内膜癌潜在的治疗靶点。2、sh RNA可有效敲低子宫内膜癌细胞株Ishikawa和RL95-2中LINC01220的表达,LINC01220的敲低可显著影响子宫内膜癌细胞的恶性生物学行为。3、LINC01220可能通过上调MAPK11促进子宫内膜癌细胞株Ishikawa和RL95-2的增殖并且抑制其凋亡,最终促进子宫内膜癌的发生与发展。