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大肠癌（carcinoma of large intestine）是世界上尤其是西方国家最常见的恶性肿瘤之一，近几年在我国呈上升趋势。区域化疗（regional chemotherapy）是近几年新发展起来的一种新型治疗方法，它可以在实体肿瘤局部提供高浓度化疗药物，达到直接杀伤肿瘤细胞，减轻临床症状，控制肿瘤发展以及术前对肿瘤降期、减少肿瘤扩散等目的，但其区域化疗作用的生物学机制尚不清楚。 为了进一步探讨大肠癌区域化疗（Regional Chemotherapy）在治疗结直肠癌中的作用机制，我们采用细胞周期同步化方法，观察结肠癌区域化疗主要药物5-FU（5-氟尿嘧啶）对人结肠癌细胞CA-Ⅱ G1／S期进程和周期调控的影响，并探讨不同的区域化疗药物浓度与肿瘤杀伤作用的量效关系。同时还通过RT-PCR方法检测癌细胞在该时期内“p16／cyclinD1／CDK4／Rb郑州大学o002年)硕士学位论文 区域化疗对人结肠癌细胞周期进程和周期调控的影响调控途径”转录水平的改变，以分析5＊U对结肠癌细胞周期进程与周期调控的影响。 实验方法与结果：采用 TdR与 NZO双阻断法同步化的结肠癌细胞经对照组、0．lmmol／L组、1刀mmol／L组、10mmol／L组的5Ill处理后，3H1dR掺入指数（LI）分别在细胞增殖M期释放后11～13h、12～14h、12～14h、13～15h明显升高。在该阶段提取细胞内总 RNA，采用 RTPCR法逆转录并扩增出 pl6。cyclinD、CDK4、Rb等基因片断，电泳后经凝胶成像扫描成像，应用Bandleader3刀凝胶分析软件进行条带分析。以目的基因条带的光密度和面积的积分值与内参照 D 2．MG条带的比值作为比较参数。发现 pl6在对照组、0刁 mmol／L组、l刀mmol／L组、10mmol／L组分别为0＊562、1．3695、1．7325、和2．5890，统计学处理V0刀1：cyclinDI 在对照组、0．lmmol／L组、l＊mmol／L组、10mmol／L组分别为2．9025、二＊352、1石235和0．8665，P＜0＊1；而CDK4和 Rb在四个组的比值经统计学处理P均川 ＊5。 结论：1．结肠癌细胞在M期同步化后，随着5Iu浓度增加勺1dR掺入高峰相应延长。 2郑州大学（2002年）硕士学位论文 区域化疗对人结肠癌细胞周期进程和周期调控的影响2．经过5FU处理的人结肠癌细胞CA－11，G；侣期时限明显延长，细胞周期进程受阻，细胞恶性增殖受抑。3．一定浓度范围内，5FU对细胞周期Q侣期的阻抑作用，可育与此时 pl6／GyClinD／CDK4／Rb调控途径中，pl6基因转录增强，CyClinD基因转录减弱有关，而与 CDK4、Rb基因的转录无关联。4．高浓度的5FU能对结肠癌细胞发挥更强的周期抑制效应。