在已研究不同形态氮养分对果树叶片生长影响的基础上,为探讨果树叶片生长对根际硝态氮产生较快反应的机理,以水培平邑甜茶幼苗为试材,克隆根系细胞分裂素合成酶(异戊烯基转移酶)编码基因(MhIPT3),同时采用实时荧光定量PCR研究MhIPT3表达量的变化,采用酶联免疫测定植株中Z+ZR与iP+iPA、IAA、ABA含量的改变,并测定分析了不同供氮形态对植株生长的影响,主要结果如下:1.根据已知苹果异戊烯基转移酶基因的EST序列,设计特异引物利用RT-PCR结合RACE技术获得了异戊烯基转移酶基因,命名为MhIPT3。GenBank注册号为DQ792508。序列分析表明,MhIPT3 cDNA全长1 314 bp,含有963 bp的完整开放阅读框,编码分子量为37.3 KD的321个氨基酸;结构分析发现,MhIPT3蛋白上含有ATP/ADP结合位点;同源性分析发现,MhIPT3蛋白与AtIPTl,AtIPT3,AtIPT4,AtIPT5,AtIPT6,AtIPT7和AtIPT8蛋白同源性分别为34.22%,53.27%,35.34%,55.29%,35.11%,47.43%和38.14%,而与AtIPT2和AtIPT9氨基酸同源性仅为25.1%和25.52%;聚类分析表明,MhIPT3蛋白与LjIPT3(Lotus japonicus)、AtIPT3(Arabidopsis thaliana)和BrIPT3 (Brassica rapa L.)蛋白的同源性最高。以平邑甜茶的DNA为模板进行MhIPT3编码区的克隆,结果发现所克隆的序列与以cDNA为模板所克隆的编码区序列完全相同,说明MhIPT3编码区内没有内含子。构建了pBI121-MhIPT3正反义表达载体,并对烟草和‘皇家嘎拉’苹果进行农杆菌侵染的遗传转化。将MhIPT3编码区正向克隆到原核表达载体pET30a-c(+),并通过原核表达获得了MhIPT3蛋白,为进一步研究异戊烯基转移酶的功能提供了条件。2.荧光定量PCR分析MhIPT3的表达发现,MhIPT3基因在平邑甜茶的根、茎、叶中均有表达且在叶中的表达量最高。对N饥饿的平邑甜茶施用NO3- 0.5 h后MhIPT3的表达量开始增加,2 h后达到最大,但NH4+处理对MhIPT3的表达没有影响;根中iP+iPA和Z+ZR与MhIPT3表达量呈现相似的变化趋势。处理24 h,NO3-处理与NH4+处理IAA含量差异不显著,ABA含量NO3-处理高于NH4+处理;到第72 h与168 h,IAA含量差异仍然不显著,ABA含量NO3-处理低于NH4+处理;处理24 h,NO3-处理的叶面积略高于NH4+处理,但差异不显著,第72 h测定结果已存在显著差异;且NO3-处理的植株生长量和株高均高于NH4+处理。