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目的通过比较不同药物浓度和时间作用条件下,血府逐瘀胶囊对人微血管内皮细胞(HMEC-1)参与血管新生的功能影响,从细胞水平验证血府逐瘀胶囊促血管新生的作用,同时选择药物促血管新生的最佳浓度及作用时间点,在此基础上分析血府逐瘀胶囊对EphB4/EphrinB2表达的影响,为下一步阐明血府逐瘀胶囊调控EphB4/EphrinB2双向通路促血管适度生长的作用机制奠定前期工作基础,也为血府逐瘀胶囊的临床应用提供现代的科学理论依据。方法将常规培养的人微血管内皮细胞(HMEC-1)随机分为空白血清对照组和含药血清干预组,人血清含量为1.25%、2.5%、5%,诱导处理时间为24h、48h、72h。利用MTT比色法和流式细胞周期测定法、Transwell迁移小室、黏附能力测定实验和体外成血管实验分别观察各组血清对HMEC-1的增殖能力、迁移能力、黏附能力和体外成血管能力的影响。利用实时定量PCR和免疫印迹技术对EphB4和EphrinB2的表达进行检测。结果1、对细胞活性的影响方面,在三个作用时间点,三个浓度的血.府逐瘀胶囊含药血清组与同等血清含量的空白血清组比较,OD值均无差异。2、对细胞增殖的影响方面,在三个作用时间点,三个浓度的血府逐瘀胶囊含药血清组与同等血清含量的空白血清组比较,S期细胞比例均无差异。3、对细胞迁移的影响方面,与同等血清量的空白对照组相比,1.25%浓度的含药血清组,在3个作用时间点上,细胞迁移数均明显增加；2.5%浓度的含药血清组,在24h作用时间点上,细胞迁移数明显减少,在48h、72h作用时间点上,细胞迁移数均明显增加；5%浓度的含药血清组,在24h作用时间点上,细胞迁移数均明显增加,在48h、72h作用时间点上,细胞迁移数均明显减少。4、对细胞黏附的影响方面,与同等血清量的空白对照组相比,1.25%浓度含药血清组在前2个作用时间点细胞黏附数无差异,仅在72h时细胞黏附数明显减少；2.5%浓度含药血清组在前2个作用时间点细胞黏附数均显著增加,在72h时无差异；5%含药血清组细胞黏附数在24h时明显减少,至48h时增加,72h时无差异。5、对促血管管腔形成方面,与同等血清含量空白对照组比较,1.25%含药血清组的血管管腔数在3个作用时间点上均无差异；2.5%含药血清组的血管控数只有在48h时显著增加,在其它2个时间点上无差异；在24h时5%含药血清组血管腔数无差异,在48h、72h时间点上均显著减少。6、与2.5%空白血清组比较,2.5%含药血清诱导细胞6h、48h对EphB4基因表达量均没有影响在诱导12h后,EphB4基因的表达上调,随后在24h时,EphB4基因的表达量明显下调。7、与2.5%空白血清组比较,2.5%含药血清诱导细胞6h、12h、24h、48h对EphrinB2基因表达量均没有影响。8、与2.5%空白血清组比较,2.5%含药血清诱导细胞12h、48h时,对EphrinB2蛋白表达无影响,在24h作用时间点使EphrinB2蛋白表达显著上调。结论1、血府逐瘀胶囊具有显著的促血管新生作用,其促血管新生作用存在最佳药物作用时间点和最适宜浓度。药物作用机制与其促细胞迁移、黏附和体外成血管等环节相关。2、血府逐瘀胶囊低浓度促进、高浓度抑制的双向调控作用和短暂性的促血管新生功效可以调控血管适度生长。3、血府逐瘀胶囊调控血管生长与其调控EphB4/EphrinB2的表达密切相关。