论文部分内容阅读
本文以国外引进昆虫病原线虫异小杆线虫Heterorhabiditis bacteriophora为研究对象，通过生物测定，对该线虫的致病性，线虫-细菌-昆虫互作，共生菌的杀虫活性和抑菌活性进行了评价，并对其抗菌毒素理化特性进行了初步的研究。 通过对菜青虫Pieris rapae、大蜡螟Galleriamellonella、棉铃虫Helicoverpa．armigema的幼虫和松墨天牛Monochamus alternatus的成虫室内致病性试验，结果表明：该线虫是广谱性的昆虫寄生线虫，对四种害虫均有较强的致病性，菜青虫、大蜡螟、棉铃虫幼虫在24-48小时内即被致死，最高死亡率达90-100％；松墨天牛成虫则要在3-7天后才能被致死；线虫对不同种害虫显示出不同的敏感性，总的来说，室内的寄生效果是较稳定的。温度对昆虫病原线虫侵染天牛有很大影响，在20-30℃范围内，线虫具有较强的侵染率，但温度一旦低于20℃或超过30℃时，侵染率显著下降至20％以下。 对共生细菌的研究表明，在线虫体内只分离到Ⅰ型菌发光杆菌（Photorhabdus luminescens），Ⅱ型菌是Ⅰ型菌体外培养的转化型，Ⅰ型菌对大蜡螟具较强的致病力，10个细胞就能使大蜡螟致死；Ⅱ型菌无致病力。在受线虫侵染的大蜡螟体内，共生菌在72h后生长便趋于一种稳定状态，48h发现其对细菌Bacillus subtilis有抗菌活性，但未发现抗真菌活性；96h大蜡螟幼虫体内的一种G+肠杆细菌Enterococcus sp生长受到强烈抑制，此外在大蜡螟体内还分离到一种不受共生菌抑制的G-细菌。体外培养的共生菌发酵滤液，12h之前未发现抗菌活性，48小时抑菌圈半径达到最大值5.5mm，共生菌的发酵滤液对真菌（Botrytis cinerea）同样没有抗菌活性。发酵滤液的杀虫活性在48h之前，对大蜡螟血腔毒力较弱，但在72h后，毒力最强，能使幼虫全部致死。 对共生细菌毒素进行了初步的分离与提取，培养滤液经80％硫酸铵沉淀，透析，冷冻干燥后，其粗提物兼具抗细菌活性和杀虫活性，但不耐高温，40℃水浴处理后即失活，粗蛋白经分子筛Sephadex G-100层析柱洗脱，洗脱峰V具抑细菌活性，各洗脱峰未发现杀虫活性。 培养条件对共生菌发酵液抑菌和杀虫活性的影响研究结果表明，在NB培养液中，25℃、30℃时共生菌发酵滤液对大蜡螟的血腔毒力最强，转数对其影响甚微。A2B2、A3B2条件下共生菌的抑细菌活性最强，最大抑菌圈半径（平均）可达6.5mm。