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目的:本研究以体外培养的细粒棘球蚴原头节为研究对象,将不同浓度的胆酸、石胆酸和鹅脱氧胆酸体外作用于细粒棘球蚴原头节,探讨胆酸、石胆酸和鹅脱氧胆酸体外对细粒棘球蚴原头节的作用。方法:从自然感染细粒棘球蚴病的绵羊肝脏内无菌获得细粒棘球蚴原头节,将其加入RPMI 1640培养基中体外培养,5d后,将原头节分别加入不同浓度胆酸、石胆酸和鹅脱氧胆酸(500、1000、2000和3000μmol/L)中体外孵育。每组加入约2000个细粒棘球蚴原头节。不同浓度胆酸、石胆酸和鹅脱氧胆酸作用细粒棘球蚴原头节不同时间,用0.1%伊红染色的方法,在倒置显微镜光镜下观察原头节的活力及形态,并绘制原头节活力曲线;电子显微镜下观察原头节超微结构改变;用Western blot检测原头节GRP78蛋白表达水平;用Caspase-3活性检测试剂盒检测原头节内caspase-3酶活性。结果:在整个实验过程中,DMSO对照组细粒棘球蚴原头节的活力几乎没有改变,而将不同浓度胆酸、石胆酸和鹅脱氧胆酸作用于细粒棘球蚴原头节,胆酸(CA)作用6d后,500μmol/L、1000μmol/L、2000μmol/L、3000μmol/L组细粒棘球蚴原头节的活力分别为94.12%、90.56%、81.43%、59.15%;连续观察,在用药第12d,500μmol/L、1000μmol/L、2000μmol/L、3000μmol/L组细粒棘球蚴原头节的活力分别为85.86%、74.53%、56.84%、26.45%,3000μmol/L CA组杀伤作用最为明显,作用第18d后,细粒棘球蚴原头节的死亡率100%。石胆酸(LCA)作用1d后,500μmol/L、1000μmol/L、2000μmol/L、3000μmol/L组细粒棘球蚴原头节的活力分别为93.63%、87.59%、75.00%、42.70%;连续观察,在用药第3d,500μmol/L、1000μmol/L、2000μmol/L、3000μmol/L组细粒棘球蚴原头节的活力分别为59.26%、43.97%、32.56%、7.45%,3000μmol/L LCA组杀伤作用最为明显,作用第5d后,细粒棘球蚴原头节的死亡率为100%。鹅脱氧胆酸(CDCA)作用3d后,500μmol/L、1000μmol/L、2000μmol/L、3000μmol/L组细粒棘球蚴原头节的活力分别为95.97%、87.95%、83.17%、23.70%;连续观察,在用药第5d,500μmol/L、1000μmol/L、2000μmol/L、3000μmol/L组细粒棘球蚴原头节的活力分别为95.23%、81.48%、49.04%、1.54%,3000μmol/L CDCA组杀伤作用最为明显,作用第6d后,细粒棘球蚴原头节的死亡率为100%。扫描电镜下观察发现胆酸、石胆酸和鹅脱氧胆酸作用后,原头节体表出现指状突起、顶端体表出现皱缩,随着作用时间和浓度的增加,渐出现顶突界面缺损,吸盘变形,虫体表面出现凹陷,指状突起增多,甚至出现虫蚀样损害。透射电子显微镜下观察发现原头节体被合胞体带变薄,结构松散,囊泡扩张,微毛减少,甚至消失;部分实质细胞基质浓缩,细胞核核周隙增宽,核仁消失,核异染色质凝集,边缘化。Western bolt检测显示,胆酸、石胆酸和鹅脱氧胆酸可降低细粒棘球蚴原头节GRP78蛋白表达水平。Caspase-3活性检测发现,较正常对照组,胆酸、石胆酸和鹅脱氧胆酸可增加原头节的caspase-3酶活性。由此证实随着度胆酸、石胆酸和鹅脱氧胆酸作用时间的延长和浓度的增加,胆酸、石胆酸和鹅脱氧胆酸对原头节的生长抑制作用越明显,具有时间依赖性和剂量依赖性。结论:胆酸、石胆酸和鹅脱氧胆酸在体外可明显抑制细粒棘球蚴原头节的生长,可能为治疗细粒棘球蚴病提供一个新的思路。