紫花松果菊中松果菊苷的分离纯化及抑菌抗衰老作用的研究

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紫花松果菊(Echinacea purpurea L.)又名紫锥菊,菊科松果菊属多年生草本植物。与狭叶松果菊(E.angustioflia)和淡紫松果(E.pallia)同为中药用价值较高的类型。紫花松果菊作为民间的草药,在美洲及欧洲已有上百年的历史。近年来,紫花松果菊在抗炎作用及调节免疫、强化免疫方面的显著作用而受到国际学者的广泛关注。本文以紫花松果菊叶为试材,开展了松果菊苷成分提取、纯化和测定工艺及其抗衰老研究。取得如下成果:1、提取工艺:本文主要通过液相色谱对松果菊苷成分进行测定,并从松果菊的研磨程度,溶剂种类,以及以乙醇浓度、料液比和提取次数为影响因素设计L9(34)正交实验表,探讨松果菊苷的最佳提取工艺。通过对比HPD-100、D-101和AB-8三种大孔树脂纯化后松果菊苷的含量选择最佳的纯化条件,从而得出一套完整的,最佳的松果菊苷的提取工艺。结果表明,研磨至60目,采用70%的乙醇溶液作为提取液,料液比1:10,提取两次。2、定性定量和纯化方法:提取液用处理好的HPD-100吸附24小时,超纯水清洗杂质,50%乙醇洗脱液洗脱,浓缩至胶状,电热鼓风箱烘干,采用HPLC测定松果菊苷,定性定量。HPLC条件为Discovery C18色谱柱(25cm×4.6mm,5μm);34℃,进样量10μl,流动相:0.1%甲酸:甲醇--73.5:26.5,持续17min,后快速(<3min)改流动相至0.1%甲酸:甲醇--70.5:29.5,持续15min,设定流速为0.9mL/min;于330nm波长处进行检查为最合适的条件。3、抗衰老试验:本文用常规的建立衰老小鼠模型,D-氨基半乳糖法诱导动物衰老。然后分别设置对照组、模型组、松果菊苷组,松果菊苷组灌胃给药,检测衰老相关指标,收集数据并分析,探讨松果菊苷抗衰老的机制。结果表明,1)松果菊苷能够使小鼠的免疫器官代偿性的增大,增加血清中的INF-γ,降低IL-6的含量,通过调节细胞免疫的途径延缓衰老的发生。2)同时,松果菊苷能够通过抑制肾脏中TGF-β1和P53基因的表达,延缓细胞的衰老,减轻小鼠的衰老症状。4、抑菌实验:采用倍比稀释法检测紫花松果菊挥发油对几种菌的最低抑菌浓度。紫花松果菊挥发油对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌的最低抑菌浓度分别为13%,6%、3%。而紫花松果菊挥发油对的红曲霉的抑菌效果不明显。采用扩散法以山梨酸钾作为对照,对比紫花松果菊挥发油、洋甘菊挥发油和山梨酸钾的抑菌活性进行对比。结果表明,在10%浓度下,山梨酸钾的抑菌效果最好,紫花松果菊挥发油的抑菌效果次之。
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