珊瑚菌子实体多糖的提取、分离纯化、结构鉴定和抗氧化活性研究

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本文初步对珊瑚菌子实体多糖进行了系统的研究:主要包括响应面法优化珊瑚菌子实体多糖提取工艺,并对提取的多糖抗氧化活性进行了研究;分离纯化得到均一多糖组分,并对其理化性质进行研究;采用乙酰化、甲基化、核磁等方式,对均一多糖的结构进行了分析。响应面优化剪切法提取珊瑚菌多糖,得到最优条件为:提取温度为72℃,料液比为1:21(g/g),时间15 min,此时多糖提取率达到15.99%。在该最优条件下提取珊瑚菌子实体多糖,分级醇沉的方法得到珊瑚菌粗多糖组分RFPF30, RFPF60, RFPF80。通过测定羟基自由基清除能力、超氧自由基清除能力、亚铁离子螯合能力以及还原能力四个指标研究其抗氧化活性。结果表明,在这三个组分中RFPF60表现出较强的还原能力和亚铁离子螯合能力,非常强的羟基自由基清除能力和超氧自由基清除能力。三者的抗氧化能力均表现出浓度相关性,有成为减轻氧化压力类功能性食品添加成分的潜力。且发现分子量较小,多糖含量较高的组分具备更好的抗氧化效果。选取RFPF60组分采用阴离子交换层析DEAE Sepharose Fast Flow和Sephacryl S系列凝胶柱层析,进行分离纯化得到多糖均一组分RFPF1、RFPF2A。高效液相色谱检测为均一组分,分子量分别为:2.18×105 Da和9.87×105Da,紫外全扫描显示两者均不含蛋白质和核酸,红外光谱表明两者均具有多糖的特征峰。通过乙酰化分析可知RFPF2A由D-甘露糖、D-葡萄糖和D-半乳糖(摩尔比为0.26:1:0.15)组成。甲基化分析得到RFPF2A主要由1,6连接葡萄糖和少量1,4连接甘露糖、1,2,6连接半乳糖(摩尔比为1:0.28:0.32)组成。1D、2D NMR分析结果表明葡萄糖为p-吡喃构型,半乳糖为α[-构型,甘露糖是p-构型。乙酰化分析可知RFPF1主要由D-半乳糖和少量的D-甘露糖、D-葡萄糖(摩尔比为1:0.28:0.47)组成。本文对珊瑚菌多糖的结构较系统的确定和研究,为探究珊瑚菌多糖活性与结构关系,提供了思路与方法借鉴。
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