随着工业迅猛发展,环境污染及食品安全问题日益突出,人口老龄化趋势明显,加上吸烟、酗酒等不良生活习惯的存在,恶性肿瘤的发生率及死亡率逐年增高。原发性支气管肺癌在恶性肿瘤中发病率及死亡率居首位,目前临床应用的治疗方案对患者预后效果不佳。通过对恶性肿瘤的研究发现,新生血管的形成在肿瘤的生长、浸润和转移中起着至关重要的作用,且持续的血管生成是肿瘤快速生长必不可少的条件。肿瘤新生血管的形成是在一定时间段、一定的环境下,由多因素、多步骤引起的一系列细胞因子介导的瀑布式生化反应过程。血管生成与肿瘤侵袭性、转移和降低患者的存活率有关,早在20多年前,就已经提出了抗血管生成治疗癌症这一观点。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是一种特异性很强的血管内皮细胞分裂素,在体内外均可有效地促进内皮细胞发生有丝分裂增殖,诱导血管形成,是迄今为止作用最强、最具有代表性的促血管生成因子。VEGF已成为主要的抗血管生成的药物靶点。90K(又称Gal-3BP、Mac2-BP或LGALS3BP),是一种高度糖基化的分泌蛋白,它作为配体与半乳糖凝素家族、E-选择素结合发挥其生物学特性,通过介导细胞增殖、细胞凋亡、细胞-细胞及细胞-基质相互作用导致肿瘤血管生成,与恶性肿瘤患者的预后密切相关。Arresten是从基底膜Ⅳ型胶原蛋白α1链的非胶原结构域衍生的内源性血管生成抑制剂,由229个氨基酸残基组成,该结构片段在体外抑制血管内皮细胞增殖和血管生成的作用分别是血管内皮抑素(Edostatin)的3倍和10倍。川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)是从传统中药川芎中提取的抑制血管生成的生物碱,具有很强的抗肿瘤作用。顺铂(Cisplatin,DDP)是恶性肿瘤常用的一线化疗药物。本实验通过观察4组小鼠的生存状态、瘤体积、瘤重、抑瘤率及检测血管生成相关因子(90K、Arresten、VEGF)的表达情况,探讨川芎嗪抑制肿瘤血管生成的可能机制,发现川芎嗪联合顺铂能够提高化疗效果。本实验通过将Lewis小鼠肺腺癌细胞注入C57BL/6小鼠右腋皮下,10天后均可成瘤,将40只小鼠随机分为生理盐水组(NS组)、川芎嗪组(TMP组)、顺铂组(DDP组)、川芎嗪联合顺铂组(TMP+DDP组)。连续治疗14天,每天观察小鼠生存状态、测量移植瘤长短径计算瘤体积,处死后完整剥离肿瘤称重计算抑瘤率。透射电子显微镜下观察肿瘤细胞结构,免疫组化、western blot检测肿瘤组织90K、Arresten、VEGF表达。实验结果发现:与NS组比较,TMP组小鼠生存质量较好,DDP组小鼠饮食、活动情况差,精神萎靡,毛色灰暗无光泽,对外界刺激反应差,体重下降明显,肿瘤增长速度慢。TMP+DDP组小鼠生存质量介于TMP组、DDP组之间。说明川芎嗪联合顺铂能够提高化疗效果,川芎嗪能够降低顺铂化疗的毒副反应。移植瘤体积大小:NS组>TMP组>DDP组>TMP+DDP组。TMP组、DDP组、TMP+DDP组瘤重均明显低于NS组(P<0.05),抑瘤率分别为25.57%、45.24%、66.5%。透射电镜下观察NS组肿瘤细胞分布密集,细胞膜完整,细胞器丰富,细胞核较大,核仁明显。其余三组肿瘤细胞体积减小,细胞膜不完整,胞质内脂滴增多,细胞器减少,部分细胞核膜不清,可见染色质边集。免疫组化结果示:TMP组、DDP组、TMP+DDP组VEGF、90K表达量较NS组降低,TMP+DDP组最低。TMP组、DDP组、TMP+DDP组Arresten表达量较NS组升高,TMP+DDP组最高。Western blot与免疫组化检测结果一致。采用金氏公式评价川芎嗪联合顺铂对小鼠Lewis肺癌的抑制作用:TMP+DDP组0.85<q<1.15,表明川芎嗪联合顺铂对小鼠Lewis肺癌有相加抑制作用。综上所述,川芎嗪能够有效抑制肿瘤生长,与顺铂联用能提高化疗效果并减轻顺铂化疗副作用。川芎嗪联合顺铂抗肿瘤机制可能是:1.通过下调90K、VEGF,上调Arresten表达,抑制肿瘤血管生成。2.改善肿瘤微循环使顺铂顺利到达作用部位,抗肿瘤生长。