论文部分内容阅读
目的：探究小型猪PRP对PDLSC成骨的作用及组织块法多次获得PDLC的生物学特性及功能是否一致。 方法：全麻下采集贵州小型猪静脉全血，三次离心法制备PRP，测定其中TGF-β1和PDGF-AB的含量。小型猪PDLSC的获得采用组织块法，有限稀释法进行STRO-1阳性细胞分离纯化，并进行扩大培养，同时绘制细胞的增殖曲线。将小型猪PDLSC分别培养在含有0.8％、1%、1.2%（V/V）PRP的生长液中，以未添加PRP组为对照，分别在第3、7、14、21天测定AKP活性检测各组细胞的成骨性。收集原代培养传代后的牙周膜组织块继续进行组织块法培养，如此反复获得原代 PDLC。每次获得的原代细胞进行扩增培养，分别选取第1、3、5次获得的PDLC分为A、B、C三组，设第一次获得的PDLC为对照组A组，绘制细胞增殖曲线，进行成骨诱导，流式细胞技术检测各组细胞周期和STRO-1表面标记物的表达，提取三个组PDLC全组DNA，实时荧光定量PCR测定PDLC相对端粒长度，Trizol提取PDLC全组RNA，实时荧光定量PCR测定PDLC端粒酶表达水平。 结果：有限稀释法单克隆纯化后细胞的增殖曲线从第3天起进入对数生长期，第8天时数量达到顶峰。PRP诱导成骨第21天茜素红染色呈阳性；三种PRP浓度培养至14天时，AKP活性达到峰值，其中1.0%组AKP活性较其他各组高(P＜0.05)，培养至第21天AKP活性降低。组织块法多次获得的三组PDLC增殖趋势和扩增数量比较相近，A、B两组 PDLC细胞周期检测结果为 G0/G1期90.33%±0.80%和90.50%±1.71%，G2期为9.67%±0.33%和9.5%±1.70%，无统计学差别（P＞0.05），C组细胞周期检测结果为G0/G1期83.25%±1.44%，G2/S期为14.3%±1.97%，G0/G1期低于 A组，结果差异具有统计学意义（P＜0.05），三组结果表明大部分细胞处于静止期。A、B、C三组PDLC STRO-1表面标记物阳性率分别为5.9%，6.0%和5.0%。在成骨诱导方面，三组PDLC在第21天时具有茜素红染色阳性的矿化结节。A、B、C三组PDLC端粒长度差异无统计学意义（P＞0.05），端粒酶表达水平C组高于A组（P＜0.05），B组与A组表达水平无差异（P＞0.05）。 结论：PRP可以诱导PDLSC成骨分化，且1.0%浓度时的诱导成骨能力最强。前三次反复利用组织块获得的小型猪PDLC生物学特性及功能相似，能否用于实验研究和临床治疗有待进一步的探讨。