目的探讨错配修复基因hMLH1对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP顺铂耐药的逆转作用及其可能的机制。方法(1)在第一部分实验中,对卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP分别用重组质粒pcDNA3.1-hMLH1和空质粒pcDNA3.1进行瞬时转染,并以SKOV3敏感细胞和未转染的SKOV3/DDP作为对照。RT-PCR和Western blot检测耐药细胞内hMLH1 mRNA及蛋白的表达变化。MTT法检测不同浓度顺铂(3.0、6.0、12.0、24.0、48.0μg/ml)对转染前后细胞的生长抑制情况。(2)在第二部分实验中,用流式细胞仪和Hochest染色法检测顺铂(6.0μg/ml)作用下转染前后细胞的凋亡情况。Western-blot检测耐药细胞内bcl-2蛋白的表达变化。结果转染后24h,经RT-PCR和Western blot检测发现, hMLH1mRNA和蛋白的表达水平在SKOV3/DDP细胞中均明显上调,与SKOV3敏感细胞接近,证实转染是成功的。MTT试验结果表明,转染重组质粒后,耐药细胞的IC50值明显降低,显示对顺铂的敏感性增强。流式细胞术和Hochest染色法表明,在顺铂作用下,转染重组质粒的SKOV3/DDP细胞出现了较多的凋亡,凋亡率明显提高。Western blot检测发现,凋亡抑制蛋白bcl-2在SKOV3/DDP细胞中的表达明显强于SKOV3细胞,而在转染hMLH1后SKOV3/DDP细胞中bcl-2蛋白的表达水平明显下调。结论hMLH1基因的成功转染能纠正卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP中该基因的缺失,从而增强耐药细胞对顺铂的敏感性,促进顺铂作用下耐药细胞的凋亡,在一定程度上逆转了人卵巢癌细胞对顺铂耐药。hMLH1基因逆转耐药的机制可能与降低细胞内bcl-2的表达水平有关。