论文部分内容阅读
目的:本研究拟利用新西兰大白兔阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（obstructive sleep apnea hypoxia syndrome,OSAHS）模型,通过分子生物学方法测定心肌组织核因子-κB P65（nuclear factorκB P65,NF-κB P65）及相关因子白细胞介素6（interleukin 6,IL-6）、白细胞介素10（interleukin10,IL-10）的表达和心肌结构的改变,探讨OSAHS对心脏损害可能的炎性机制及下颌前移矫治器（mandibular advancement device,MAD）治疗OSHAS对心肌结构的影响。方法:1.分组:雄性新西兰大白兔18只,6月龄,随机分为3组,每组6只,分别为OSAHS组,MAD组,Control组（正常对照组）。2.动物模型的建立:OSAHS组和MAD组动物全麻下,软腭黏膜肌层注射2 ml透明质酸钠凝胶,拍摄上气道锥形束CT（Cone beam Computer Tomography,CBCT）并进行多导睡眠监测,评估OSAHS建模情况,建模成功后,MAD组动物制作下颌前移矫治器,再次对三组实验动物拍摄CBCT并进行睡眠监测,评估MAD的治疗效果。3.仰卧位睡眠:建模成功后,每天上午三组动物经口腔灌注10%水合氯醛5-6ml/kg,使其每天仰卧位睡眠2 h-4 h小时,连续8周。4.标本的采集及处理:观察8周后,取心脏标本,乳头肌水平切取部分心肌组织置于4%多聚甲醛中固定,剩余心肌组织投入液氮中冻存,-80oC保存。利用天狼猩红染色法,偏振光下观察心肌间质纤维化程度;分子生物学方法检测NF-κB P65 mRNA和蛋白的相对表达量,及IL-6、IL-10的表达量,并进行相关性分析。结果:1.建模完成后,OSAHS组呼吸暂停症状明显,MAD组呼吸暂停低通气症状缓解,对照组呼吸均匀,状态平稳。2.CBCT结果:OSAHS组上气道矢状向间隙和横截面直径明显减小,差异有显著性（P<0.05）,MAD组矫治器戴入前后气道明显增宽,差异有显著性（P<0.05）。3.多导睡眠监测记录:OSAHS组动物与MAD组、对照组相比,呼吸暂停低通气指数（AHI）升高、血氧饱和度（SaO2）下降、最低血氧值降低,差异有显著性（P<0.05）,MAD组动物带入矫治器后,AHI显著降低,差异有显著性（P<0.05）。4.OSAHS组、MAD组、Control组NF-κB P65蛋白相对表达量分别为1.11±0.04、0.62±0.03、0.57±0.04,OSAHS组NF-κB P65蛋白的表达量较其它两组明显增高,差异有显著性（P<0.05）,MAD组与Control组无差别（P>0.05）。5.NF-κB P65mRNA的相对表达量分别为1.54±0.08、1.07±0.08、1.05±0.06,OSAHS组NF-κB P65 mRNA的表达量均较其它两组明显增高（P<0.05）,MAD组与Control组无差别（P>0.05）。6.OSAHS组、MAD组和正常对照组心肌组织中IL-10和IL-6的浓度分别为57.68±2.16 pg/ml、50.78±1.44 pg/ml、49.77±2.24 pg/ml,68.43±1.11pg/ml、38.25±0.94 pg/ml、37.22±1.22 pg/ml。OSAHS组与MAD组、对照组相比IL-10和IL-6表达量均明显升高,差异有显著性（P<0.05）,MAD组与Control组无差别（P>0.05）。7.偏振光下:OSAHS组、MAD组和对照组胶原纤维的比例分别为0.47±0.02、0.20±0.01、0.18±0.01,Ⅰ型/Ⅲ型胶原纤维比例分别为7.10±1.17、2.43±0.26、2.40±0.23,OSAHS组胶原纤维的量明显多于MAD组和对照组且Ⅰ型胶原纤维的量增多更显著,差异有显著性（P<0.05）MAD组与Control组无差别（P>0.05）。结论:1.OSAHS兔心肌组织NF-κB通路激活,调控自身及下游炎症因子的表达,加速心肌纤维化的发生发展。2.下颌前移矫治器（MAD）早期治疗OSAHS可降低心肌组织NF-κB的表达,下调相关炎症产物,预防心肌纤维化的发生发展。