论文部分内容阅读
目的:通过观察DAXX对球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖的抑制作用,探讨其发生机制,为延缓血管狭窄的病理改变提供理论依据。方法:从南华大学动物中心取雄性大鼠(400g±100g)52只,构建颈总动脉球囊损伤血管狭窄动物模型,运用脂质体局部转染DAXX质粒,随机分为4组:假手术组、手术组、空转染组、转染组。于术后30分、1小时、2小时、6小时、24小时取球囊损伤后的大鼠颈总动脉标本,用于免疫组化检测DAXX及JNK的时序性;于术后7天及14天每组各取4只大鼠颈总动脉标本,HE染色测量内膜中膜比值观察血管狭窄程度、免疫组化检测抗原蛋白及PCR检测mRNA的表达情况。结果:大鼠颈总动脉球囊损伤后,局部转染DAXX7天及14天后,测PCR及免疫组化,可知转染组较手术组DAXX表达均明显增加,表明转染成功。手术后7天及14天组织切片HE染色显示:手术组较正常组平滑肌细胞增殖明显,管壁增厚,管腔狭窄,且14天较7天增殖更为明显,手术组与空转染组基本相同;提示模型构建成功。相较于手术组,转染组平滑肌细胞增殖明显减少,内膜层增厚程度大为减轻,管腔相对通畅,通过观察内膜/中膜面积的比值发现转染组比手术组比值明显降低,这就说明DAXX能有效抑制平滑肌细胞增殖、延缓血管狭窄。另PCR检测DAXX及JNK基因转录,结果显示:与正常组相比,手术组平滑肌细胞中DAXX及JNK的mRNA显著增多(P小于0.05),提示手术使DAXX及JNK的mRNA表达上调;而相对于手术组,转染组DAXX及JNK的mRNA表达上调更为显著(P小于0.05)。同时利用免疫组化方法检测发现:与正常组相比,手术组和空转染组平滑肌细胞中DAXX及JNK抗原蛋白的表达有所上升,说明血管损伤诱导DAXX及JNK蛋白表达上调;转染组DAXX及JNK的表达上升更为显著,表明局部转染后促进DAXX及JNK蛋白的表达。结论:球囊刺激可诱导平滑肌细胞中DAXX的表达,并且其表达呈时序性;DAXX可以抑制血管平滑肌细胞增殖、有效延缓血管狭窄;其抑制作用可能与上调JNK表达、进而诱导平滑肌细胞凋亡途径有关。