猪TTV(Torque teno virus)又名猪输血传播病毒（transfusion transmitted virus）。属于细环病毒科(Anelloviridae)，壬型细环病毒属(Iotatorquevirus)。从1999年首次证实TTV存在于猪群中，许多学者对猪TTV进行了流行病学调查，发现猪TTV早在1985年就存在于西班牙猪场中，并且已在世界范围内流行。虽然尚未有猪TTV直接致病的报道，但其广泛流行性以及与其他疾病之间的关系已经使之不容忽视。鉴于目前国内对猪TTV的检测方法仍以PCR为主，本实验针对国内流行的TTV2的ORF1的部分基因进行了表达，并以获得的纯化蛋白作为抗原建立了间接ELISA检测方法，为该病毒提供了血清学检测手段，同时为建立标准化检测试剂盒以及疫苗的研制奠定了基础。　　 1猪TTV2 ORF1的部分基因在大肠杆菌BL21中的克隆与表达本研究根据Genbank中已发表的猪TTV2的ORF1基因序列设计了两对引物。以提取的TTV2DNA为模板，通过PCR的方法分别扩增出1206bp和855bp两个片段，将这两个扩增片段分别插入克隆载体pMD18-T，测序验证正确。然后分别将两个克隆质粒以及表达载体pcold同时用XhoⅠ和HindⅢ进行双酶切，将酶切后的两段基因分别与酶切后的表达载体进行连接，然后转化入大肠杆菌BL21中，用IPTG进行诱导表达，经SDS-PAGE和Western blot印迹分析，证实两种蛋白在大肠杆菌中均得到了高效表达，分子量分别约为52KD和39KD。　　 2重组蛋白的纯化以及多克隆抗体的制备表达的两种蛋白均以包涵体的形式存在，因此在纯化过程中需进行超声破碎，然后用镍柱进行纯化。将纯化的两种蛋白分别免疫新西兰大白兔。首免时要将抗原与弗氏完全佐剂1∶1混匀，并于首免之前耳缘动脉采血作为阴性对照。之后每隔两周免疫一次，并将抗原与弗氏不完全佐剂1∶1混匀，共免疫4次。末次免疫7天后对兔进行心脏采血，经Western blot检测在相应位置处有清晰的条带，间接ELISA检测多抗效价达1∶12800。　　 3间接ELISA检测方法的建立将纯化得到的pcold-g1蛋白作为抗原包被ELISA板，建立了猪TTV2的间接ELISA检测方法，并确定了间接ELISA检测的最佳条件:抗原最佳包被浓度为1.65μg/ml，血清最佳稀释度为1∶160，最佳包被液和封闭液分别为碳酸盐缓冲液和2％脱脂奶粉，最佳包被条件为4℃包被过夜，最佳封闭时间为37℃2h，血清作用时间1h，二抗浓度1∶4000，二抗37℃作用30min，TMB显色5min。经统计学分析确定阴阳性的临界值为0.248。与其他猪病阳性血清的特异性试验证明该方法特异性好，批内批间重复性试验结果变异系数均小于10％，说明该方法具有较好的重复性。利用该方法对两个猪场352份血清样品进行了检测，阳性率分别为42.7％和7.5％。