研究背景小肠是营养物质消化吸收的重要器官。肠黏膜屏障是机体抵御外来病原物质入侵的重要部分,可分为物理、化学、生物和免疫屏障。流行病学研究发现,高脂饮食等不良生活习惯增加炎症性肠病的发病率。当肠道发生炎症,肠黏膜屏障受损,肠上皮细胞所处微环境中缺氧情况加重。低氧诱导因子1（hypoxia inducible factor-1,HIF-1）是调节细胞内氧稳态的关键转录因子。常氧情况下,HIF-1的α亚基经脯氨酰羟化酶（prolyl hydroxylase,PHD）途径降解。然而,高脂饮食对肠黏膜屏障功能有怎样的影响?肠上皮细胞PHD2/HIF-1α信号途径在其中发挥了什么作用?这些问题目前尚未见报道。因此,本研究通过动物实验和不同层次的肠黏膜屏障功能分析,探索高脂饮食对肠黏膜屏障功能的影响,研究肠上皮细胞PHD2/HIF-1α信号途径在高脂饮食后肠黏膜屏障功能改变中的作用。研究方法第一部分研究的实验对象为8-10周龄C57BL/6J小鼠（n=6-8/组）,实验组（high fat diet,HFD）使用12周高脂饲料饲养,对照组（control,CON）使用普通饲料饲养。通过观察体重变化、肠组织形态、肠黏膜通透性、肠道菌群结构、抗菌肽m RNA表达情况等对肠黏膜屏障功能进行评价,探究高脂饮食对肠黏膜屏障功能的影响。第二部分研究运用Cre-Lox P系统构建肠上皮细胞特异性Hif1a基因敲除小鼠(Hif1a VKO)和Phd2基因敲除小鼠(Phd2VKO),探索肠上皮细胞PHD2/HIF-1α信号途径在肠黏膜屏障中的作用。通过对肠上皮细胞条件性基因敲除小鼠进行高脂饮食干预,观察肠上皮细胞PHD2/HIF-1α信号途径是否参与了高脂饮食导致的肠黏膜屏障功能的改变。研究结果高脂饲养12周后,与CON相比,HFD相对体重变化更大（P<0.05）,血清中TG和TC等含量更多（P<0.05）,肠黏膜通透性高（P<0.05）,厚壁菌门相对丰度高（P<0.05）,而拟杆菌门相对丰度低（P<0.05）,抗菌肽Reg3g、Reg3b和Defb1的m RNA表达水平低（P<0.05）。HFD-Hif1a VKO与对照组HFD-Hif1aflox/flox相比,高脂饲养后体重增加程度大（P<0.05）,抗菌肽Reg3g、Defa5和Defb1m RNA表达水平更高（P<0.05）,菌群结构存在显著差异。Phd2VKO与对照组HFD-Phd2flox/flox相比,高脂饲养后肠黏膜屏障功能相关指标的差异无统计学意义。研究结论本研究发现,高脂饮食通过升高肠黏膜通透性、降低抗菌肽m RNA表达以及改变肠道菌群结构等,在一定程度上造成小鼠肠黏膜屏障功能失衡。肠上皮细胞HIF-1α参与了高脂饮食导致的肠黏膜屏障功能改变。然而,肠上皮细胞Phd2特异性敲除对相关指标无显著影响,提示高脂饮食导致的肠黏膜屏障功能改变可能不通过PHD2相关信号途径。