目的 1．血管内皮生长因子受体-3基因的原核表达载体构建 2．血管内皮生长因子受体-3基因的原核融合表达 方法 以本实验室构建的克隆质粒为模板，设计合适引物，在上游引物中加入酶切位点和起始密码，在下游引物中加入终止密码和酶切位点，把上述VEGFR3扩增产物经切胶回收纯化后与pBV220质粒经双酶切纯化后的产物连接，把该质粒命名为pBV220-VEGFR3，转化大肠杆菌DH5α，筛选出阳性菌株，温控诱导表达，超声破菌，对包涵体进行洗涤纯化。以pBV220-VEGFR3为模板通过PCR方法构建C端含有HisTag的pBV220-VEGFR3his质粒并转化大肠杆菌DH5α，用Western-blotting鉴定，用Ni²⁺-NTA树脂柱对表达产物进行纯化。 结果 构建了pBV220-VEGFR3质粒表达载体，SDS-PAGE电泳表明在大肠杆菌DH5α中成功表达出VEGFR3因子，同时构建了pBV220-VEGFR3融合表达载体，SDS-PAGE电泳和Western-blotting结果表明在大肠杆菌DH5α中成功表达出VEGFR3融合蛋白，用Ni²⁺-NTA树脂柱纯化后获得VEGFR3融合蛋白纯品。 结论 应用基因工程技术，成功构建了pBV220-VEGFR3质粒表达载体，表达纯化出蛋白，为进一步的研究奠定了基础。