论文部分内容阅读
糖尿病病因及发病机制十分复杂,有研究认为糖尿病、炎症和各种炎症因子之间存在必然的联系,慢性炎症是重要因素,高血糖和氧化应激的主要靶位是转录因子NF-κB。而NF-κB调控免疫反应和炎症反应,抑制树突状细胞的成熟,调控与炎症、细胞增生、细胞分化等密切相关的多种基因的表达,与糖尿病密切相关。本文拟研究抑制剂作用于糖尿病外周血树突状细胞的NF-κB信号转导通路各环节,抑制相关因子的表达,阻断NF-κB的激活,诱导树突状细胞的低成熟等方面,以期减低炎症和免疫反应,保护胰岛β细胞,改善临床症状,探讨新的糖尿病治疗方法。本研究应用流式细胞术检测外周血T细胞亚群及测定树突状细胞表面标志变化,发现糖尿病患者CD4+T细胞增加和CD8+T细胞减少并不明显,但是CD4+／CD8+T细胞比值增加明显,同时发现外周血表达CD11c+(DC1的表面标志)的树突状细胞增高,说明糖尿病患者处于免疫失衡状态。通过体外诱导培养人外周血DC1细胞,发现糖尿病患者培养DC1表面标志MHCⅡ、CD86、CD80及CD40等表达均较健康对照者增高。利用合成的NF-κB特异性寡聚脱氧核苷酸(NF-κB ODN)转染外周血培养DC1细胞,脂质体-ODN的转染效率接近95%。树突状细胞转染NF-κB OND可以抑制NF-κB p65表达水平,同时抑制NF-κB的核转位,凝胶电泳迁移率改变实验(EMSA)显示NF-κB ODN还可以抑制树突状细胞的NF-κB与DNA结合活性。对DC1细胞活性检测发现,NF-κBODN可以明显抑制树突状细胞IL-12分泌活性,抑制TNF-α分泌。流式细胞术检测发现,NF-κB ODN可以抑制外周血培养DC1表面标志的表达,并且其抑制作用不能被LPS逆转。混合淋巴细胞反应发现NF-κB ODN转染的DC1刺激T细胞增殖能力下降,ELISA检测发现NF-κB ODN转染DC1降低炎性细胞因子TNF-α、IL-12等的分泌,抑制Th1型细胞因子INF-γ的分泌,相反,刺激Th2型细胞因子IL-4、IL-10的分泌增加。流式细胞术测定NF-κB ODN对外周血DC1诱导Th1／Th2淋巴细胞的极化作用,结果表明NF-κB ODN转染DC1抑制Th1细胞的分化,对Th2细胞的分化无影响,从细胞水平上证明NF-κB ODN转染DC1可以抑制Th细胞向Th1方向转化。综上所述,NF-κB ODN可以抑制糖尿病患者外周血DC1的NF-κB活性,抑制NF-κB p65的表达水平及NF-κB与DNA结合活性,降低DC的成熟程度,减少DC表面共刺激分子的表达和细胞因子的分泌,从而纠正糖尿病患者DC的功能异常和内源性T细胞亚群Th1／Th2的平衡,将可能成为一条治疗糖尿病的新途径。