大鼠肝癌细胞高增殖亚群生物学与耐药特征实验研究

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目的:探讨大鼠肝癌中是否存在增殖能力不同细胞,并初步研究高增殖能力细胞亚群生物学特征,比较与肝癌细胞药敏特征的差异。方法:1、有限稀释法单克隆培养大鼠肝癌细胞,找出不同可增殖的肝癌细胞亚群(HSG-1、HSG-2),并对他们的细胞生长特征、细胞周期分布、成瘤能力以及持续培养下分化能力等生物学特征进行研究。2、取HSG-2与肝癌细胞,阿霉素(0.2μg/mL)、氟尿嘧啶(5μg/mL)及顺铂(1μg/mL)作用72h后,SRB法分别检测化疗药物对HSG-2与肝癌细胞的抑制率。结果:(1)共有6只大鼠培养出比较稳定的能持续增殖亚群,其中稳定出现的2个亚群分别命名为HSG-1与HSG-2;(2)HSG-2细胞倍增时间、最大增生倍数、细胞周期分布均有显著性差异。(3)HSG-2细胞成瘤比例为100%,1/10对数稀释后,成瘤比例为50%,与对应亚群原密度接种为0的比较,P=0.001;P=0.023,均有显著性差异。(4)HSG-2细胞亚克隆培养,产生的子代克隆集落出现了形态异质性的细胞,同样产生梭形及多角形细胞;将多角形克隆集落转种植到24孔板扩大培养可见到同上两种不同形态的细胞集落,而HSG-1细胞亚克隆培养未能产生多角形子代细胞。HSG-2亚克隆的子代多角形细胞种植到裸鼠皮下,成瘤率也达100%(6/6);而HSG-2子代梭形细胞种植到裸鼠皮下未见成瘤。(5)阿霉素,氟尿嘧啶与顺铂对肝癌大鼠HSG-2抑制率与对肝癌细胞抑制率比较有显著性差异,t值与P值分别为:t=4.321,P=0.002;t=4.965,P=0.001与t=4.285,P=0.002。(6)阿霉素、氟尿嘧啶、顺铂对肝癌大鼠HSG-2的IC50与对肝癌细胞IC50比较有显著性差异,t值与P值分别为:t=10.604,P<0.001;t=5.642,P<0.001与t=9.470,P<0.001。结论:HSG-2细胞增殖能力低、致瘤能力强,有一定分化能力,具备大鼠肝癌干细胞的初步特征。化疗药物对肝癌大鼠HSG-2抑制小于对肝癌细胞抑制,提示肝癌中肿瘤干细胞与其他实体瘤TSC类似,有独特的耐药机制。
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