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目的:
课题组前期揭示鲜石龙芮天灸对ANIT诱导的大鼠肝内胆汁淤积性黄疸具有治疗作用,但尚未对其作用机制以及相关的体内化学成分进行研究。鉴于肝内胆汁淤积导致的胆汁酸失衡与胆红素在肝细胞内的代谢过程密切相关,本文采用胆汁诱导人正常肝细胞(L-O2)损伤的细胞模型,从血清药理学的角度对其抗胆汁淤积的作用进行研究,并对鲜石龙芮的体内化学成分进行探索,进一步为鲜石龙芮天灸治疗胆汁淤积型黄疸及其作用物质基础提供科学依据。
方法:
将L-O2细胞随机分为空白组、模型组、阳性药组以及含药血清组,除空白组外其余组通过胆汁暴露建立肝细胞损伤模型。利用天灸疗法在SD大鼠大椎、肝俞、脊中三个穴位上贴敷鲜石龙芮药材,6次/12h,持续三天,腹主动脉收集大鼠血液,离心得含药血清。将不同时间点的含药血清给予损伤的L-O2细胞,检测谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT),探讨鲜石龙芮天灸疗法对胆汁淤积造成的肝细胞损伤的体外治疗效果。
利用HPLC分析新鲜石龙芮原液与其挥发性成分降低Z-Z构型胆红素含量的差异性,进一步验证鲜石龙芮中挥发性成分是否与Z-Z构型胆红素发生作用。同时探究经鲜石龙芮天灸疗法治疗后大鼠体内间接胆红素的变化过程。
采用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对鲜石龙芮中进入血液的挥发性成分原白头翁素进行检测,与NIST17and Wiley数据库中相关数据进行了比较鉴定。
结果:
1.人正常肝细胞L-O2经胆汁暴露后AST、ALT指标明显升高,细胞存活率明显降低,细胞贴壁松散,易脱落,通过给予鲜石龙芮含药血清后,AST、ALT指标降低,细胞生长状态有明显的改善。
2.实验发现鲜石龙芮原液与挥发性成分对Z-Z构型胆红素含量的影响有区别,同时分析大鼠血清中的Z-Z构型胆红素的HPLC色谱图发现,鲜石龙芮天灸治疗后的大鼠血清中Z-Z构型胆红素含量降低程度远高于模型组大鼠。
3.通过对气质联用仪的总离子流图分析未发现鲜石龙芮中的挥发性成分原白头翁素及其二聚体白头翁素,但是药效学研究证明鲜石龙芮能有效改善模型大鼠的相关生理指标,所以其治疗作用的相关成分还需更深一步的研究。
结论:
1.通过对L-O2细胞的生活状态、酶含量变化的分析显示鲜石龙芮天灸大鼠的含药血清对胆汁诱导的肝细胞损伤有较好的修复作用。
2.该结果说明不仅是原白头翁素在贴敷处对胆红素Z-Z构型异构化产生了作用,鲜石龙芮原液中的其他化学成分可能也参与了这一过程,但挥发油可能为主要参与成分。
3.GC-MS法只能对鲜石龙芮中挥发性入血成分进行分析,故后续研究将针对血清的前处理方式进行改善,同时更换更为灵敏的检测仪器,比如三重四级杆气相质谱,或者采用检测范围更为广泛的高效液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)。
课题组前期揭示鲜石龙芮天灸对ANIT诱导的大鼠肝内胆汁淤积性黄疸具有治疗作用,但尚未对其作用机制以及相关的体内化学成分进行研究。鉴于肝内胆汁淤积导致的胆汁酸失衡与胆红素在肝细胞内的代谢过程密切相关,本文采用胆汁诱导人正常肝细胞(L-O2)损伤的细胞模型,从血清药理学的角度对其抗胆汁淤积的作用进行研究,并对鲜石龙芮的体内化学成分进行探索,进一步为鲜石龙芮天灸治疗胆汁淤积型黄疸及其作用物质基础提供科学依据。
方法:
将L-O2细胞随机分为空白组、模型组、阳性药组以及含药血清组,除空白组外其余组通过胆汁暴露建立肝细胞损伤模型。利用天灸疗法在SD大鼠大椎、肝俞、脊中三个穴位上贴敷鲜石龙芮药材,6次/12h,持续三天,腹主动脉收集大鼠血液,离心得含药血清。将不同时间点的含药血清给予损伤的L-O2细胞,检测谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT),探讨鲜石龙芮天灸疗法对胆汁淤积造成的肝细胞损伤的体外治疗效果。
利用HPLC分析新鲜石龙芮原液与其挥发性成分降低Z-Z构型胆红素含量的差异性,进一步验证鲜石龙芮中挥发性成分是否与Z-Z构型胆红素发生作用。同时探究经鲜石龙芮天灸疗法治疗后大鼠体内间接胆红素的变化过程。
采用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对鲜石龙芮中进入血液的挥发性成分原白头翁素进行检测,与NIST17and Wiley数据库中相关数据进行了比较鉴定。
结果:
1.人正常肝细胞L-O2经胆汁暴露后AST、ALT指标明显升高,细胞存活率明显降低,细胞贴壁松散,易脱落,通过给予鲜石龙芮含药血清后,AST、ALT指标降低,细胞生长状态有明显的改善。
2.实验发现鲜石龙芮原液与挥发性成分对Z-Z构型胆红素含量的影响有区别,同时分析大鼠血清中的Z-Z构型胆红素的HPLC色谱图发现,鲜石龙芮天灸治疗后的大鼠血清中Z-Z构型胆红素含量降低程度远高于模型组大鼠。
3.通过对气质联用仪的总离子流图分析未发现鲜石龙芮中的挥发性成分原白头翁素及其二聚体白头翁素,但是药效学研究证明鲜石龙芮能有效改善模型大鼠的相关生理指标,所以其治疗作用的相关成分还需更深一步的研究。
结论:
1.通过对L-O2细胞的生活状态、酶含量变化的分析显示鲜石龙芮天灸大鼠的含药血清对胆汁诱导的肝细胞损伤有较好的修复作用。
2.该结果说明不仅是原白头翁素在贴敷处对胆红素Z-Z构型异构化产生了作用,鲜石龙芮原液中的其他化学成分可能也参与了这一过程,但挥发油可能为主要参与成分。
3.GC-MS法只能对鲜石龙芮中挥发性入血成分进行分析,故后续研究将针对血清的前处理方式进行改善,同时更换更为灵敏的检测仪器,比如三重四级杆气相质谱,或者采用检测范围更为广泛的高效液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)。