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前言胃癌是严重威害人类健康的最常见的恶性肿瘤之一,但长期以来包括手术切除和其它综合性治疗并未带来令人满意的生存率,因此在肿瘤基因水平上寻找新的突破口并开展靶向治疗已成为目前肿瘤研究的热点之一。O~6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(O~6-methylguanine-DNA-methyltransferase,MGMT)是细胞中一种修复DNA损伤的酶,近些年研究表明MGMT基因不仅是对抗亚硝脲类药物的耐药基因,而且是与肿瘤发生有关的潜在癌基因或抗癌基因。DNA依赖的蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase,DNA-PK)由3个亚基组成:Ku80、ku70与DNA依赖的蛋白激酶催化亚单位(DNA-dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)。研究发现DNA-PK的功能广泛,是因为DNA-PK是磷酸化的蛋白酶,底物包括肿瘤抑制蛋白的p53转录因子(原癌基因)、C-Fos等等,特别在调节DNA转录、复制、修复中起重要作用。本研究通过应用免疫组化的方法,检测两种蛋白在胃癌中的表达情况,分析其与胃癌临床病理特征之间的关系,以及两者之间的相互联系,旨在探讨MGMT,DNA-PKcs在胃癌组织中的表达及其临床意义。材料和方法1、病例和标本收集中国医科大学附属第一医院及辽宁省肿瘤医院2005年10月～2006年8月手术切除的胃癌组织标本124例。其中男性92例,女性32例。年龄24-85岁,中位年龄60岁。所有患者术前均未接受化疗、放疗。病理均为腺癌,高分化(乳头状腺癌,高分化管状腺癌)40例,中分化(中分化管状腺癌)25例,低分化(低分化腺癌,印戒细胞癌,粘液腺癌)59例。组织分期采用1997年国际抗癌联盟(UICC)制定的TNM临床分期标准,Ⅰ期17例,Ⅱ期46例,Ⅲ期37例,Ⅳ期24例。2、试剂鼠抗人MGMT单克隆抗体(工作浓度为即用型);鼠抗人DNA-PKcs单克隆抗体(工作浓度为即用型),SP试剂盒及DAB显色剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司。3、方法将124例胃癌标本与24例正常胃组织标本制作成组织芯片,采用免疫组化S-P法,按照S-P检测试剂盒说明书所示步骤进行,切片经柠檬酸缓冲液(PH=6.0)高压热修复预处理。组织芯片由上海芯超生物科技有限公司制作。4、结果判定MGMT和DNA-PKcs均以胞核和或胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性染色,依照阳性细胞比例和显色强度分别得分,将两项得分相乘得到该视野的最终得分,选取的5个视野得分的平均值为最后得分。最后该切片按照得分分为以下三个等级:0.1分为(一),2-4分为(+),＞4分为(++)。(一)为阴性表达,(+)为阳性表达,(++)为强阳性表达。5、统计分析方法采用SPSS13.0统计软件,卡方检验及Spearman秩相关分析,采用双侧检验,P＜0.05为具有统计学意义。实验结果1、MGMT,DNA-PKcs在124例胃癌组织中阳性表达率分别为58.9%(73/124),31.5%(39/124)。2、男性中MGMT的阳性表达率为66.3%(61/92),女性中MGMT的阳性表达率为37.5%(12/32),两者有统计学差异,P＜0.01。高中分化胃癌中MGMT的阳性表达率为70.8%(46/65),低分化中阳性表达率为45.8%(27/59),两者有统计学差异,P＜0.01。MGMT蛋白表达与分化程度、性别相关,与年龄、肿瘤侵润深度、淋巴结转移情况、远处转移情况、TNM分期无关,而DNA-PKcs均与之无关。3、两种蛋白的表达强度之间存在正相关,相关系数及P值为r=0.342,P=0.000。结论1、MGMT在胃癌中高表达,DNA-PKcs在胃癌中低表达。2、MGMT蛋白表达与分化程度、性别相关,与年龄、肿瘤侵润深度、淋巴结转移情况、远处转移情况、TNM分期无关,而DNA-PKcs均与之无关。1、两种蛋白的表达强度之间呈正相关。