炭疽杆菌毒力大质粒的驱除及比较蛋白质组学研究

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炭疽芽孢杆菌引发的炭疽病是一种烈性的人畜共患的传染病,危害性极强。尤其近些年,国际上一些恐怖分子利用炭菌杆菌的芽孢制造的恐怖事件,严重干扰了人们的日常生活及社会经济秩序。因此,对其进行研究具有一定的理论价值和潜在的社会效益。在本研究中,运用质粒不相容性原理,分别以炭疽杆菌A16R与A16作为实验的出发菌株,构建了pXO1质粒缺失突变株A16RPI1和pXO2质粒缺失突变株A16PI2。对菌株A16RPI1与A16RP及A16PI2与A16R在生长趋势、糖代谢等方面进行了比较,并鉴定了A16PI2的荚膜生成能力;分别制备了A16RPI1与A16RP的23 h的全菌蛋白质样品和A16PI2与A16R的20 h的全菌蛋白质样品,通过pH 4-7梯度的双向电泳找出差异蛋白,并对差异蛋白点进行了质谱检测分析。得到了以下主要结果:1)菌株A16RPI1与菌株A16RP的生长趋势基本一致,且二者的糖代谢也无区别。2)菌株A16PI2与菌株A16R的生长趋势也是一致的,但二者的糖代谢情况稍有不同,A16PI2可以代谢果糖但是A16R却不能代谢果糖。经过荚膜培养实验验证,A16PI2确实不能生成荚膜。3)菌株A16RPI1与菌株A16RP稳定期蛋白质在pH 4-7这一梯度有5个差异蛋白,这些蛋白都定位在细胞质中,主要是翻译过程中的延伸因子和与氨基酸代谢相关的酶。4)菌株A16PI2与菌株A16R稳定期蛋白质在pH 4-7这一梯度有22个差异蛋白,这些蛋白基本都定位在细胞质中,只有一个功能未知的蛋白定位在细胞膜上,它们在功能上主要与翻译过程、转录调节、氨基酸的转运和代谢及芽孢的生成相关。
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