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猪戊型肝炎病毒(Swine Hepatitis E Virus,SHEV)开放阅读框3(Open Reading Frame3,ORF3)在病毒感染细胞而引发的信号转导过程中发挥着极其重要的作用。本实验以pMD18T-ORF3质粒为材料,通过EcoRⅠ和SalⅠ双酶切,将获得的ORF3片段克隆至大肠杆菌表达载体pET42(+)中,构建成原核表达载体pET42a-ORF3。经酶切、测序鉴定正确后,将pET42a-ORF3转化大肠杆菌BL21(DE3)。以IPTG诱导融合蛋白His/GST-ORF3表达,并进一步优化IPTG诱导表达条件。SDS-PAGE分析显示His/GST-ORF3在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,表达蛋白分子质量约为45.5ku。对表达的融合蛋白进行Ni2+-NTA柱纯化,以SDS-PAGE检测纯化的表达产物,BandScan4.3生物图像分析软件分析表明:纯化后的融合蛋白纯度达到88％以上。用纯化的融合蛋白作为包被抗原,建立用于SHEV抗体检测的间接ELISA方法。并用该方法检测了来自海口和三亚地区18个猪场的190份猪血清样品,阳性率达84.7％。与商品试剂盒(万泰)检测结果相比,阳性符合率为91.5％。用纯化的融合蛋白皮下多点注射免疫雄性大白兔,制备兔抗SHEV-ORF3多克隆抗血清。用建立的间接ELISA法检测抗血清的效价,结果表明获得的抗血清效价在1:12800以上。Western Blot比较分析也显示:此抗血清具有很强的特异性。此实验结果为进一步研究SHEV-ORF3蛋白的功能以及HEV感染机制奠定了基础。