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铅(Lead,Pb)是一种已知的重金属有毒物质,广泛存在于环境中。研究发现,慢性Pb中毒可使肾脏内自由基增加,引起肾脏氧化应激。葡萄籽原花青素(Grape seed proanthocyanidin extract,GSPE)是天然多酚类化合物,具备清除自由基、抗氧化和抗炎等功能。本研究的主要目的是明确GSPE在Pb暴露大鼠肾脏氧化损伤方面的保护作用及核因子E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)信号通路在GSPE保护Pb诱导的肾脏氧化损伤中的作用机制。在本研究中,共选取40只健康雄性wistar大鼠,随机分为四组:对照组、Pb暴露组、解毒组(Pb+GSPE)和GSPE组,每组10只。试验周期为30 d,对照组:自由饮水,生理盐水(1 mL/kg·d)灌胃;Pb暴露组:0.25%醋酸铅(lead acetate,PbAc)溶液自由饮用,生理盐水(1 mL/kg·d)灌胃;解毒组(Pb+GSPE):0.25%PbAc溶液自由饮用,GSPE溶液(200mg/kg·d)灌胃;GSPE组:自由饮水,GSPE溶液(200 mg/kg·d)灌胃。在第31 d进行采样测定:(1)分别称取大鼠体重和两侧肾脏总质量,计算肾脏脏器指数。(2)大鼠腹主动脉采血,离心取血清,全自动生化分析仪测定血清肌酐(Serum creatinine,SCr)和尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)水平。(3)火焰原子吸收光谱法测定肾脏中Pb的含量。(4)肾脏组织切片,HE染色,光学显微镜观察组织病理变化。(5)肾脏组织匀浆,应用试剂盒测定肾脏中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(Methane dicarboxylic aldehyde,MDA)、还原性谷胱甘肽(Glutathione,GSH)和谷胱甘肽s转移酶(Glutathione s-transferase,GST)的水平。(6)原位末端标记法(Terminal Deoxynucleoitidyl Transferase Mediated Nick-End Labeling,TUNEL)测定肾脏中细胞凋亡水平。(7)免疫组化检测肾脏中Nrf2的表达。(8)提取肾脏总蛋白,western blotting测定肾脏中Nrf2、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein1,Keap1)、血红素氧合酶1(Heme oxygenase-1,HO-1)、醌氧化还原酶1(NAD(P)H:quinone oxidoreductase l,NQO1)、Bax、Bcl-2和Bcl-xl蛋白的含量。结果表明:(1)GSPE可以降低Pb暴露大鼠SCr和BUN水平,作用效果达到10%和31%,还可降低Pb中毒引起的脏器指数增加,作用效果达到21%,修复组织损伤。(2)GSPE降低Pb在体内的蓄积,效果可达到33%。(3)GSPE具有清除氧自由基的能力,提高肾组织中GSH、GST和SOD的水平,降低MDA的水平。(4)GSPE可以激活Nrf2信号转导通路,促进肾脏中Nrf2及Ⅱ相解毒酶的表达,降低肾脏氧化损伤及细胞凋亡。上述结果揭示,GSPE对Pb暴露大鼠肾脏具有保护作用,GSPE通过激活Nrf2信号通路,提高Pb暴露大鼠肾脏抗氧化酶活性,降低细胞凋亡,实现对Pb暴露大鼠肾脏的保护作用。