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【目的】研究用HPLC同时测定两面针中乙氧基白屈菜红碱与氯化两面针碱含量的方法;研究利用离子树脂提取分离两面针中乙氧基白屈菜红碱和氯化两面针碱的最佳工艺。【方法】采用Hypersil BDS C18色谱柱（250 mm×4.6 mm, 5μm）,研究测定两面针中乙氧基白屈菜红碱和氯化两面针碱含量的样品处理方法、流动相以及两个标准品的测定线性范围和回收率等方法学指标。利用高效液相色谱法为检测手段,以静态吸附和解吸附的方法,对乙氧基白屈菜红碱和氯化两面针碱的吸附率和解吸附率大小比较,对7种树脂进行筛选,选择出D001AM和122两种树脂进行详细的研究。通过考察吸附动力学、最大上样量、上样液乙醇浓度、上样液pH值、上样液浓度、解吸附剂这几个指标,选择出D001AM树脂进行优化。通过对D001AM树脂吸附次数、温度对吸附的影响、杂质的洗脱、解吸附剂的优化这几方面的指标进行考察,得到了最佳工艺。【结果】高效液相色谱法测定乙氧基白屈菜红碱和氯化两面针碱的含量:流动相为乙腈-水-三乙胺-磷酸（25:75:1:1）,流速为1mL/min,检测波长为272nm。乙氧基白屈菜红碱在2～32 mg/L范围内线性关系良好（r=0.9999）,平均加样回收率为96.80%,RSD为1.43%;氯化两面针碱在2～32 mg/L范围内线性关系良好（r=0.9999）,平均加样回收率为97.91%,RSD为1.20%。离子树脂提取分离乙氧基白屈菜红碱和氯化两面针碱的最佳工艺:两面针药材用浓度为60%的乙醇溶液提取3次,合并3次得到的提取液。其总生物碱的提取率为91.34%,乙氧基白屈菜红碱的提取率为85.38%,氯化两面针碱的提取率为88.64%。以此提取液作为上样液验证工艺。从7种离子树脂中筛选出效果较好的树脂D001AM树脂,采用静态吸附和解吸附的方式进行实验;解吸附时分别用4%NaHCO3-25%EtOH溶液和3.0 mol/L HCl-70%EtOH溶液进行分步吸附,得到的解吸附液分别离心,可得到母液和沉淀。乙氧基白屈菜红碱的平均吸附率和解吸附率分别是90.86%和100.99%,提取率为78.89%;氯化两面针碱的平均吸附率和解吸率分别为97.26%和71.66%,提取率为61.18%。【结论】D001AM型阳离子树脂能同时提取分离乙氧基白屈菜红碱和氯化两面针碱,且吸附率大,解吸附率较高,操作简便,成本较低,避免了大量的使用氯仿进行萃取的操作,经济环保,有潜在的工业应用价值。