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目的:肺癌是我国及世界上致死率最高的恶性肿瘤之一,本课题组前期研究发现强心苷类药物-地高辛(Digoxin)与阿霉素(Adriamycin)联用具有协同治疗非小细胞肺癌作用。本文采用纳米共组装及细胞膜包裹技术构建地高辛/阿霉素仿生纳米给药体系,以期改善地高辛治疗窗窄、阿霉素毒性作用大的不足,增强其靶向递送至肿瘤细胞的能力、减少对正常组织细胞的影响,为该类新型抗肿瘤纳米给药体系的研发提供依据。方法:1.通过溶剂交换法制备地高辛/阿霉素纳米粒子(DANPs),提取非小细胞肺癌A549细胞的细胞膜(CCCMs),进而利用CCCMs对DANPs进行修饰,得到地高辛/阿霉素仿生纳米给药体系(DAMNPs),利用透射电镜、粒径与电位分析仪对DANPs、DAMNPs的形貌和尺寸进行表征。2.利用荧光分光光度计测定DANPs、DAMNPs中阿霉素的体外药物释放。3.采用流式细胞术、激光共聚焦成像系统检测游离地高辛/阿霉素(D+A)、DANPs、DAMNPs被各类细胞摄取的情况。4.分别采用MTT法、流式细胞术评价D+A、DANPs、DAMNPs对A549细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导作用。5.采用Western blot和RT-q PCR技术检测D+A、DANPs、DAMNPs对A549细胞中DNA单、双链损伤标记物RPA、γ-H2AX以及DNA单、双链损伤修复蛋白XRCC1、RAD51表达的影响。6.建立斑马鱼A549肿瘤模型,利用荧光定量法检测D+A、DANPs、DAMNPs对该模型的抗肿瘤效果。7.建立Balb/c裸鼠移植瘤模型,通过测量肿瘤体积、重量并结合免疫组织化学染色的方法,评价D+A、DANPs、DAMNPs的体内抗肿瘤效率。结果:1.DAMNPs颗粒大小分布均匀,粒径在150~200 nm内,Zeta电位在-30--35m V之间,且一周内无显著变化。2.DAMNPs在中性微环境中释放慢,在弱酸性微环境中更容易释放;且与DANPs相比,具有缓释药物的作用。3.DAMNPs与D+A、DANPs相比,更容易被A549细胞摄取,且可躲避巨噬细胞的吞噬作用。4.DAMNPs与D+A、DANPs相比,对A549的增殖抑制及凋亡诱导作用更强。5.DAMNPs与D+A、DANPs相比,可诱导A549细胞中DNA单链损伤标记蛋白RPA和双链损伤标记蛋白γ-H2AX的表达,同时抑制A549细胞中DNA单链损伤修复蛋白XRCC1及双链损伤修复蛋白RAD51在m RNA水平的表达。6.在地高辛浓度为1.4μM、阿霉素浓度为0.7μM时,可抑制肿瘤细胞的增殖,在该浓度下,DAMNPs对斑马鱼体内A549细胞的增殖抑制作用显著强于D+A、DANPs。7.在Balb/c裸鼠皮下移植瘤模型中,当地高辛浓度为1 mg/kg、阿霉素浓度为0.4 mg/kg时,DAMNPs较D+A、DANPs肿瘤体积、重量显著变小,肿瘤增殖活性标志物Ki-67的表达减少。结论:1.成功制备了DAMNPs,该仿生纳米给药体系的分散性良好,稳定性强,具有良好的药物缓释作用。2.体外实验阐明了DAMNPs与D+A、DANPs相比,可显著抑制A549细胞的增殖,这可能与其靶向同源肿瘤细胞,以及抑制DNA单双链损伤修复相关。3.DAMNPs的体内抗肿瘤效果优于D+A、DANPs。地高辛/阿霉素仿生纳米给药体系提高了两种药物联用的抗肿瘤效率,为该类新型抗肿瘤药物的研发提供依据。