Stat5a对山羊乳腺上皮细胞凋亡的调控研究

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信号转导和转录激活子5a (Stat5a)调节细胞增殖和生存相关基因的表达,并在调控怀孕、泌乳和退化期乳腺功能的过程中发挥重要作用。甲状旁腺相关蛋白(PTHrP)在胞内钙转运、乳腺发育以及乳腺肿瘤中发挥着重要作用。虽然Stat5a和PTHrP均参与乳腺发育,以及乳腺上皮细胞的增殖和凋亡,但是两者在山羊乳腺上皮细胞凋亡过程中的关系尚不清楚。因此,本文探索了Stat5a在山羊乳腺上皮细胞中对PTHrP的调控作用,以及两者在乳腺上皮细胞增殖和凋亡过程中的作用。获得主要结果如下:(1)生物信息学分析表明山羊Stat5a分子量大小为90693Da,等电点为5.92,包含了编码794个氨基酸的2385bp的开放阅读框(ORF);核苷酸序列相似性分析表明与绵羊的相似性最高(98%),与爪蟾的性最低(78%);系统进化分析山羊Stat5a氨基酸序列与绵羊最近;组织差异表达分析表明山羊Stat5a基因在乳腺中的表达最高,在肾脏中表达最低。(2)催乳素(PRL)处理山羊乳腺上皮细胞24h后,Stat5a的靶基因Bcl-xl、CyclinD1、Mcl1、Pim1基因mRNA表达均上升,但PTHrP的mRNA表达量降低;Stat5a抑制剂pimozide处理山羊乳腺上皮细胞18h后, Bcl-xl、CyclinD1、Mcl1、Pim1基因的mRNA表达降低,PTHrP的mRNA表达量随着pimozide浓度的升高而增加;并且Stat5a受到抑制后Bcl-2的mRNA表达减少,乳腺上皮细胞增殖受到抑制,细胞凋亡促进,但是当山羊乳腺上皮细胞中抑制Stat5a后再超表达PTHrP后,Bcl-2的mRNA表达上升,Bcl-2/Bax比率增加,细胞增殖抑制和凋亡促进明显缓解。(3)用不同浓度CaCl2处理山羊乳腺上皮细胞24h后,PTHrP的mRNA表达量随着CaCl2浓度的升高而增加;Ca2+抑制山羊乳腺上皮细胞Bcl-2mRNA表达,抑制乳腺上皮细胞增殖及促进细胞凋亡,但是当山羊乳腺上皮细胞经过CaCl2处理后再超表达PTHrP后,Bcl-2表达上升,Bcl-2/Bax比率增加,细胞增殖抑制和凋亡促进明显缓解。。(4)Stat5a抑制后促进MMP-9的mRNA表达,但是PRL处理山羊乳腺上皮细胞24h后,MMP-9的mRNA表达下降;当用CaCl2处理山羊乳腺上皮细胞后,MMP-9在mRNA水平表达上升;同时发现PTHrP超表达和干扰表达后,MMP-9的mRNA表达分别上升和下降。综上所述,在山羊乳腺上皮细胞中,Stat5a抑制PTHrP的表达,并且PTHrP抑制由pimozide和Ca2+诱导的细胞凋亡。
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