论文部分内容阅读
趋化因子RANTES/CCL5是一类可诱导的、分泌型的小分子量炎症性细胞因子，具有趋化和活化T细胞和单核细胞的功能。其中包含有68个氨基酸残基，分子量为8kd的蛋白质，主要来自于NK细胞及T淋巴细胞，其对组织的损伤、感染和肿瘤的免疫起到重要的作用。目的：本实验探讨趋化因子CCL5在糖尿病合并弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse largeB-cell Lymphoma，DLBCL)中的作用机制，从分子、细胞及动物水平探讨CCL5基因的作用及其部分的分子机理，旨在为CCL5在糖尿病合并DLBCL作用机制提供有参考意义的实验数据。方法：体外培养人正常B细胞和DLBCL细胞，RT-PCR分别检测其CCL5mRNA表达；通过5mmol/L、30mmol/L两种糖浓度体外培养人弥漫大B淋巴瘤细胞株和鼠源性弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株A20，RT-PCR分别检测其CCL5mRNA表达； BALB/c小鼠腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病鼠模型,通过慢病毒转染技术建立稳定的低表达CCL5和高表达CCL5细胞株。将低表达CCL5、高表达CCL5和未经过转染的三种细胞株皮下注入糖尿病BALB/c小鼠和正常血糖BALB/c小鼠体内，分别观察成瘤率、成瘤时间、肿块大小和质地；瘤组织常规HE染色切片，免疫组化测各组CCL5的表达；提取各组BALB/c小鼠外周血，ELISA方法检测外周血CCL5表达。结果：1、体外培养人DLBCL细胞株Ly1、Ly8、Ly10，其CCL5mRNA表达高于均正常B细胞（P<0.05）。2、含Glu30mmol/L培养人DLBCL细胞株Ly1、Ly8、Ly10和鼠DLBCL细胞株A20，培养2W后其CCL5mRNA均高于Glu5mmol/L培养（P<0.05）。3、通过向糖尿病小鼠体内注射低表达CCL5、高表达CCL5、未经转染的细胞株A20，糖尿病小鼠成瘤率分别为A1：93.3%；A2：60%；A3：66.6%，成瘤时间为A1：7.0±0.85d； A2：9.5±2.8d；A3：9.0±1.8d。高于正常血糖鼠成瘤率B1：20%；B2：20%；B3：6.6%，成瘤时间为B1：12±1.3d；B2：14±2.5d；B3：12±4.2d。4、免疫组化检测糖尿病小鼠成瘤组织CCL5表达高于正常血糖小鼠瘤组织。5、ELISA测糖尿病鼠外周血CCL5表达量高于正常血糖鼠。结论：1、人DLBCL细胞株CCL5mRNA表达高于正常B细胞；2、高糖培养人DLBCL细胞株和鼠DLBCL细胞株中CCL5mRNA高于低糖培养，这表明高糖环境下DLBCL肿瘤细胞能够产生更多的CCL5；3、高表达CCL5比低表达CCL5的DLBCL细胞株更容易在体内成瘤，肿瘤生长更快；在相同条件下糖尿病鼠比正常小鼠更容易成瘤；4、糖尿病小鼠成瘤组织中CCL5的表达高于正常小鼠的成瘤组织；5、糖尿病小鼠血清中CCL5的表达高于正常小鼠。综上所述，高血糖可使体内CCL5的浓度增高，高表达的CCL5可能是促进糖尿病并发DLBCL的重要因素之一。