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目的1以阴道免疫微环境为切入点,研究宫颈上皮内瘤变(CIN)患者及正常人群阴道分泌物中细胞因子IFN-γ、IL-10的含量变化,探讨细胞因子变化与病变进展的相关性,寻找潜在的预后评价及疗效评价指标。2研究中药清毒栓及干扰素α-2b对宫颈高危型HPV感染的疗效,及其对阴道局部免疫环境的调节作用,探讨中药清毒栓可能的免疫调节机制。3以HPV18阳性的宫颈癌细胞系HeLa为研究对象,以MHC-Ⅰ抗原呈递通路为切入点,研究中药清毒栓及中药单体β-榄香烯抗病毒、抗肿瘤的分子机制。方法临床研究1采用病例对照研究,以宫颈细胞病理学为良性反应性改变的女性为对照组,以宫颈组织病理学为CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ的女性为试验组,于入组患者卵泡期收集阴道灌洗液,ELISA法检测阴道灌洗液中IFN-γ、IL-10的含量,采用非参数Kruskal-Wallis检验3组间细胞因子含量差异,并采用spearman分析细胞因子与病变程度及细胞因子与年龄的相关性。2以对照组IFN-γ、IL-10含量均值95%可信区间的下限作为标准,将试验组IFN-γ、IL-10含量二分为含量上升、含量下降两组,作为自变量,以官颈上皮内瘤变作为因变量,采用单因素logistic回归分析,分析IFN-γ、IL-10含量变化与宫颈上皮内瘤变的相关性,对相关因素进行多因素logistic回归分析,建立回归模型,并对回归模型的预测能力进行评价。3对符合宫颈高危型HPV感染病例入组标准患者进行治疗,按照患者治疗意愿,分为清毒栓治疗组、干扰素α-2b治疗组、随访组,治疗3个疗程,在完成治疗后的第1个月随访,于治疗前及随访时收集阴道灌洗液。ELISA法检测阴道灌洗液中IFN-γ、IL-10含量。分析药物治疗HR-HPV感染的临床疗效,探讨药物治疗、疗效及阴道免疫微环境改变3者的相关性。实验研究1以MTT法检测中药清毒栓水提醇沉液、中药单体β-榄香烯、干扰素α-2b对HeLa田胞生长抑制作用,选出合适的药物浓度及干预时间,进行下一步试验。2以流式细胞术检测细胞表面HLA-Ⅰ蛋白表达,western blot检测细胞内HLA-Ⅰ蛋白表达,real-time PCR检测细胞中HLA-Ⅰ类分子HLA-A、B、C基因表达,评价药物干预对HLA-Ⅰ的调节作用。3分别以western blot去及real-time PCR去检测MHC-I抗原呈递通路相关分子TAP1、TAP2、LMP2、LMP7及内质网分子伴侣CNX、CRT、BIP蛋白及基因表达,探讨中药对于MHC-Ⅰ抗原呈递通路的调节作用。结果1正常对照组、CINⅠ组、CINⅡ-Ⅲ组比较,阴道灌洗液中IFN-γ含量组间差异有统计学意义,与病变进展相关；IL-10含量组间差异有统计学意义,但与病变进展无明显相关性。2阴道灌洗液中IFN-γ含量的降低(OR：6.003(95%CI 2.759～13.062)),IL-10含量的升高(OR：2.367(95%CI 1.201～4.667)),可作为CIN患病的危险因素。建立回归模型,该模型阳性预测值为84.9%,阴性预测值为51.7%,准确度为71.2%,尚无法应用于临床。3清毒栓治疗组、干扰素α-2b治疗组及随访组,HPV转阴率分别为38.46%、30.00%、20.00%,疗效差异无统计学意义。4清毒栓及干扰素α-2b凝胶治疗后,阴道灌洗液中IFN-γ水平升高(β<0.05),IL-10前后比较差异无统计学意义。5中药清毒栓、中药单体β-榄香烯、干扰素α-2b均可促进HeLa细胞表面HLA-I蛋白表达,其中干扰素α-2b可上调HLA-A mRNA表达,β-榄香烯及清毒栓可上调HLA-A、BmRNA表达。6中药清毒栓、中药单体β-榄香烯、干扰素α-2b均可增加HeLa细胞内抗原呈递通路相关分子TAP1、TAP2、LMP2、LMP7的蛋白表达,清毒栓可上调4种分子的基因表达,但β-榄香烯及干扰素α-2b对4种分子的基因表达无影响。7中药清毒栓、中药单体β-榄香烯、干扰素α-2b均可上调内质网分子伴侣CRT、CNX的蛋白表达,干扰素及β-榄香烯可上调BIP的蛋白表达。3种药物均有上调CRT、CNX、BIP基因表达的趋势,但差异无统计学意义。结论1通过临床研究,我们认为阴道灌洗液中IFN-γ的含量变化可能是反映宫颈上皮内瘤变局部免疫反应的指标。阴道灌洗液中IFN-γ含量的降低、IL-10含量的升高是CIN患病的危险因素。中药清毒栓可能通过上调阴道免疫微环境IFN-γ水平起到抗病毒的作用。2基于实验研究的结果,我们认为中药清毒栓、中药单体β-榄香烯及干扰素均可通过调节抗原呈递通路相关分子的蛋白及基因表达,起到促进抗原呈递的作用,可能是以上药物抗肿瘤、抗病毒的作用机制之一。