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附睾作为避孕靶组织具有极少的内分泌和遗传副作用,研究附睾的功能及精子成熟过程有助于新型男性避孕药物的设计和开发。基因IMDS-60的EST首先发现于子宫,却在附睾里有较高表达。本文的工作致力于附睾中IMDS-60基因全长cDNA的克隆和初步研究,以及附睾特异基因Binlb蛋白水平的相关研究,为进一步研究这些基因在附睾中的功能打下基础。
通过同源EST搜索和PCR的方法,在小鼠附睾里取得IMDS-60基因带完整开放阅读框的cDNA序列,它编码的氨基酸与C130090K23Rik基因序列(来自Mus musculus,16天胚胎头部)编码的氨基酸100%相同。Northern杂交的结果表明IMDS-60 mRNA在子宫、附睾、精囊腺和胃的样品中均有表达,其中又以在附睾中的表达丰度最高,其表达受雄激素正调控,表达量从3周龄到成年期最高。
为了对大鼠附睾特异表达的beta-defensin Binlb的功能提供佐证,我们从三个方面进行了研究。利用大鼠Binlb在小鼠中的同源基因mBinlb的抗体进行免疫组化实验发现mBinlb蛋白存在于附睾头部靠近体部区域,并能与小鼠精子结合,结合信号集中在精子头部顶体后(post-acrosome)区域,这与大鼠Binlb的结合模式类似,下一步将研究mBinlb是否也促进精子运动:构建了非附睾特异beta-defensin RBD-1的稳定转染细胞株,体外抗菌活性实验表明细胞分泌的RBD-1具有抗菌活性,这为下一步进行大鼠Binlb与RBD-1促使精子运动的功能对比实验作了铺垫;精子运动需要Ca<2+>的释放,组成Ca<2+>释放通道的IP<,3>R的精子结合实验显示,其精子结合模式与Binlb有相近之处。