曲霉是一种广泛存在于自然界中的腐生菌及正常人体皮肤粘膜的常驻真菌，属于条件性致病真菌。其致病率在条件性真菌感染中仅次于白念珠菌。在致病谱中肺曲霉病最常见，过去的 30 年里其发病率显著增加，成为免疫受损人群主要致死性并发症之一。如果不治疗，患者死亡率达 100％。即使经有效的抗真菌治疗，其治愈率仅为 34％，因此曲霉病的基础和临床研究已引起广泛的重视。过去认为曲霉分泌的金属蛋白酶、精氨酸蛋白酶 (PEP) 等在入侵人体过程中起主要作用。但目前研究认为曲霉分生孢子对宿主组织细胞的粘附作用是其致病力的关键，两者之间的粘附作用主要是通过细胞外基质蛋白 (Extracelluar matrix) 主要成分纤维连接蛋白(Fibronectin)介导的。 目的 本课题主要研究纤连蛋白 (Fn) 与分生孢子之间粘附作用的关系以及分生孢子的致病力与其表面受体的关系，对曲霉的致病机制进行了较深入的探索。 方法 本课题分为体内实验和体外实验两部分。前者在建立急性原发侵袭性肺曲霉病动物模型的基础上观察用胰酶处理烟曲霉分生孢子前后孢子致病力的变化——观测除去分生孢子细胞表面上的 Fn 受体后引发的SD大鼠原发侵袭性肺曲霉病动物模型致病性的变化。后者采用共距焦免疫荧光电镜、扫描电镜、透射电镜观察不同时间段烟曲霉分生孢子表面形态学的变化——用扫描电镜、透射电镜观察分生孢子在静止期和生发膨胀期等不同时间段表面形态的改变；通过共距焦免疫电镜观察测量分生孢子细胞表面的 Fn 受体的分布状态，借助抗原抗体的特异性结合，来证明在分生孢子细胞表面确有纤连蛋白的相应受体存在；通过流式细胞仪(FCM)测定不同浓度纤连蛋白 (Fn) 与分生孢子间的粘附作用——测定纤连蛋白(Fn) 与烟曲霉分生孢子粘附率的变化；通过流式细胞仪 (FCM) 观测用试剂预先处理的分生孢子与纤连蛋白 (Fn) 相互粘附作用的变化以及分生孢子活力的变化——观测不同浓度胰酶处理后的分生孢子细胞凋亡情况。 结果 1．体外实验：随着纤连蛋白浓度的增加，纤连蛋白与分生孢子的粘附率也凸 雷二旱匡大学硕大竿凶处文 q土勿罂 应成肩与饨霸谷专地 增加，但却有浓度依赖性和饱和性（P＜0．05＼ 当纤连蛋白为 50 u g／ml 时烟曲霉分生抱子与其粘附率最高：当用胰蛋白酶预先处理曲霉分生抱 子，则 Fn与烟曲霉分生抱子的粘附率随着胰酶浓度的增加而降低（P＜ 0．05）。 共距焦免疫电镜：发现含有荧光的Fn配体一受体均匀分布在曲霉分 生抱子表面。－扫描电镜观察：可见静止期分生抱子细胞的表面具有特征性的小棘状 层形式，有许多毛刺状突起分布在其表面。在细胞培养液中膨胀生发过程 中，小棘状层形式逐渐破碎暴露出内部细胞壁层，大约4h后完全降解，分 生抱子呈现表面略光滑球形体。大约6h后膨胀的抱子长出芽管。 透射电镜观察：未见到胞壁内有毛刺状突起存在。 FCM检测抱子的凋亡：用不同浓度的胰酶处理的抱子，其活力没有显 著差异，未见凋亡峰出现。。2．体内实验：原发侵袭性肺曲霉病动物模型可观察到一定浓度的曲霉分生 泡子不能使健康的SD大鼠致病却易使处于免疫抑制状态下的SD大鼠致 病。烟曲霉分生抱子对心、肝和肾等脏器功能均有不同程度的损害。 结 论 门）纤连蛋白（Fn）与曲霉分生抱子的粘附作用有浓度依赖性和饱和性。 门）静止期分生抱子的表面可表达出高水平Fn受体。带有放射性荧光标 记的Fn配体一受体均匀地分布在静止期分生抱子最外面小棘状层； 抱子膨胀过程中表面小棘状层逐渐脱落；胞壁内没有受体存在。。门）用蛋白质破坏性试剂可除去刺猾毛样小棘状层，可能导致分生抱子 致病力的下降。 （4）经过胰酶预处理的烟曲霉分生抱子所引起的原发侵袭性肺曲霉病动 物模型与其对照组有显著差异。说明分生抱子致病力与其表面Fn受 体的多寡密切相关。