超深低温条件下较长冷冻时间对异体神经移植免疫排斥的影响

来源 :泸州医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yulong19841001
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目的:观察超深低温(一196℃)条件下较长冷冻时间对异体神经移植再生的影响,寻找较长且相对有效的保存时限,使异体神经移植免疫排斥反应最小,再生效果最好,并逐步建立神经组织库模型,使之更好的服务于基础研究和临床治疗。方法:分组,将120只雌性Wistar大鼠(体重280±30g),按随机原则分为取材组30只,其余90只每组15只分为对照组A组(新鲜自体神经移植组)、B组(新鲜异体神经移植组)和实验组:C组(取材组神经超深低温冷冻保存3周后移植组)、D组(取材组神经超深低温冷冻保存6周后移植组)、E组(取材组神经超深低温冷冻保存9周后移植组)、F组(取材组神经超深低温冷冻保存12周后移植组)。取材,将水合氯醛和蒸馏水按质量分数5:95配置为95%水合氯醛,甘油和蒸馏水按体积分数1:1配置为50%甘油。用95%水合氯醛按0.7ml/100g腹腔注射将取材组Wistar大鼠麻醉,固定于动物实验台上并备皮,于股后外侧行长约1.5cm的横行切口暴露双侧坐骨神经切取坐骨神经干长约1.0cm,总计60根。将取下的坐骨神经干分4组每组15根放于50%甘油的EP管中,而后置于超深低温(-l96℃)的液氮瓶中,根据不同冷冻时间要求进行保存。神经移植,A组:将坐骨神经取下后立即原位移植于自体;B组:将坐骨神经取下后立即两两交叉移植;C组:取材组神经在超深低温条件下冷冻3周后在常温下用生理盐水复温后进行异体移植;D组:取材组神经在超深低温条件下冷冻6周后在常温下用生理盐水复温后进行异体移植;E组:取材组神经在超深低温条件下冷冻9周后在常温下用生理盐水复温后进行异体移植;F组:取材组神经在超深低温条件下冷冻12周后在常温下用生理盐水复温后进行异体移植。C、D、E、F组的异体神经移植组按随机原则进行操作,神经断端按束膜缝合法用11-0尼龙线端端缝合4-6针,所有组别术后均不用药物处理。指标观察,术后间隔一定时间观察各组别大鼠术侧部肢体的肿胀、运动、足部糜烂、移植段神经颜色、血循及周围组织和它黏连情况;于术后3、6、9周分别从各组取5只大鼠做神经电生理检测,同时于术后第9周做光镜、电镜观察。结果:从大体观察上看,A、C、D组术后肿胀糜烂较轻,神经修复速度快,功能恢复好,其中A组效果最优,C、D组间差别不大且和A组逼近,E、F组稍次, B组最差。移植9周后,电生理结果显示:A、C、D组动作电位峰值、神经传导速度两指标非常接近,A与C、A与D、C与D之间P值均大于0.05,无显著差异;光镜、电镜结果显示C、D组神经已完成基本修复且情况近似,整体效果趋于A组,B组最次。结论:异体神经超深低温冷冻保存3周、6周后的移植再生效果近似,且逼近于新鲜自体神经修复效果。
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