近来，局麻药的脊髓神经毒性成为麻醉学及疼痛治疗学领域关注的重点。在椎管内麻醉时，为达到更好的麻醉效能，充分利用不同局麻药的优点，常常将中长效局麻药混合使用以达到起效迅速，维持时间长的目的。局麻药伍用后脊髓神经毒性是否发生变化？不同配比的局麻药伍用是否对脊髓神经毒性产生影响？如何早期防治局麻药引起的神经毒性损伤？是值得研究的问题。为了探讨这些问题，本实验做了如下工作:　　论文一:利多卡因伍用布比卡因或罗哌卡因鞘内注射对大鼠神经行为及脊髓神经结构的影响　　目的:　　观察利多卡因伍用布比卡因或罗哌卡因后的的脊髓神经毒性变化。　　方法:　　SD大鼠经L4、5腰椎间隙鞘内置入PE-10导管，尖端至骶1水平，单笼饲养3d后行利多卡因筛选试验。选择鞘内置管成功、利多卡因筛选试验阳性的大鼠48只随机分为6组，每组8只，鞘内分别注射NS（S组）、1.065％布比卡因（B组）、1.5％罗哌卡因（R组）、5％利多卡因（L组）、5％利多卡因+1.065％布比卡因液（LB组）、5％利多卡因+1.5％罗哌卡因液（LR组）。采用单盲法观察注药后1～4d的鼠尾热痛阈值(TFL)、爪机械痛阈值(PWT)、下肢运动恢复时间的变化，光镜及透射电镜下观察脊髓的病理改变，并对马尾神经进行病理损伤评分。　　结果:　　B组、R组的TFL与S组比较无显著差别(P＞0.05);LR组TFL较同时点的其它各组明显增加(P＜0.05)。各组PWT在术后第1天均恢复正常(P＞0.05)。各组大鼠双后腿均在2小时内恢复运动。光镜观察:S组、B组、R组脊髓结构正常。L组、LB组见马尾神经纤维局灶水肿。LR组见马尾神经纤维水肿及脱髓鞘改变，伴尾段脊髓后角白质的水肿。病理损伤评分:B组、R组、L组和LB组无显著差别(P＞0.05)，LR组高于其它各组(P＜0.05)。透射电镜:B组、R组仅见轻微的有髓神经纤维及无髓神经纤维水肿，L组和LB组部分有髓神经纤维出现局灶板层结构疏松，LR组见轴索肿胀、变型、轴索与髓鞘分离，无髓神经纤维轮廓消失。　　结论:　　5％利多卡因伍用1.5％罗哌卡因鞘内注射后的脊髓神经毒性较其单独给药明显增强;而伍用等效浓度的布比卡因后，其脊髓神经毒性变化不明显。　　论文二:不同比例的利多卡因-布比卡因混合液鞘内注射后大鼠神经行为及脊髓神经结构的变化　　目的:　　比较观察不同配比的10％盐酸利多卡因与2.5％盐酸布比卡因混合液的脊髓神经毒性变化　　方法:　　将10％盐酸利多卡因与2.5％盐酸布比卡因，按1∶3、1∶2、1∶1、2∶1、3∶1容积比混合，观察其神经行为及脊髓神经结构的变化。选择鞘内置管成功、利多卡因筛选试验阳性的大鼠48只随机分为6组，每组8只，鞘内分别注射NS（S组）、25％盐酸利多卡因+1.875％盐酸布比卡因（LB13组）、3.33％盐酸利多卡因+1.67％盐酸布比卡因（LB12组）、5％盐酸利多卡因+1.25％盐酸布比卡因（LB11组）、6.67％盐酸利多卡因+0.83％盐酸布比卡因（LB21组）、7.5％盐酸利多卡因+0.625％盐酸布比卡因（LB31组）。单盲法观察药物注射后1～4d的TFL、PWT、下肢运动恢复时间，光镜及透射电镜下观察脊髓的病理改变，并对马尾神经进行病理损伤评分。　　结果:　　LB31组TFL明显延长(P＜0.05)，后腿运动恢复时间异常延长。光镜观察:LB13组、LB12组、LB11组见马尾神经纤维局灶水肿，而LB21组、LB31组出现了脱髓鞘变性改变。LB31组见脊髓后角白质水肿。病理损伤评分:LB21组和LB31组病理损伤评分高于LB13组、LB12组、LB11组(P＜0.05)。透射电镜:LB13组、LB12组、LB11、LB21组、LB31组见脊髓后角白质间质水肿、有髓神经纤维的板层结构疏松、轴索肿胀等改变，其中LB21组、LB31组损伤较重。　　结论:　　大鼠鞘内注射不同容积比的10％利多卡因与2.5％布比卡因混合液时，脊髓神经毒性随着混合液中利多卡因的绝对浓度的增加而加重，当二者容积比低于1∶1时脊髓神经毒性较轻。　　论文三:鞘内注射NGF对利多卡因致大鼠脊髓损伤后Caspase3mRNA表达的影响　　目的:　　观察鞘内注射NGF对利多卡因致脊髓神经毒性损伤是否有保护作用。　　方法:　　选择鞘内置管成功的大鼠100只，随机分为生理盐水对照组（S组）和NGF治疗组（N组）两个大组，以鞘内注射高浓度利多卡因为参照点，每大组分为P0、P1、P2、P5、P8五个亚组，每组10只。P0亚组:假手术组;P1亚组:损伤组;P2亚组:治疗1d组;P5亚组:治疗4d组;P8亚组:治疗7d组。P1亚组、P2亚组、P5亚组、P8亚组均鞘内注射20％盐酸利多卡因20μl。P2亚组、P5亚组、P8亚组从利多卡因注射后第1天始，分别连续鞘内注射NSNGF1d、4d、7d，每日二次，每次注射NS(20μl)或NGF（10μg/20μl）。连续评测两组中P8亚组大鼠的TFL值及大鼠运动功能，光镜及透射电镜下观察脊髓的病理改变。观察S组大鼠局麻药损伤前后NGF在脊髓中的定位及表达;并用Western-blot法测定脊髓组织NGF蛋白的表达情况。RT-PCR的方法检测各组大鼠脊髓caspase3mRNA的基因转录水平变化。　　结果:　　1.大鼠鞘内注射高浓度利多卡因后脊髓灰、白质中NGF免疫阳性物质表达明显上调，以后角白质最为明显。形态上看，主要在神经胶质细胞的胞浆中表达。　　2.Westen-blot检测结果表明，大鼠鞘内注射高浓度局麻药后，脊髓组织中NGF蛋白表达明显增高(P＜0.05)。　　3.两组中的P8亚组的观察:病理改变光镜:S组后角白质广泛水肿、脊膜细胞大量增生、广泛的空泡变性;N组见后角白质神经纤维水肿，脊膜细胞少量增生，空泡变性不明显。透射电镜:S组见有髓神经纤维的髓鞘板层结构广泛肿胀疏松，无髓神经纤维模糊不清;N组见有髓神经纤维的髓鞘板层结构局部疏松，可见肿胀的无髓神经纤维。神经行为:N组的TFL及MF较S组明显降低，P＜0.05。　　4.鞘内注射利多卡因后caspase3 mRNA基因表达水平即显著升高(P＜0.05)，第5天升高最为明显。S组及N组组间比较，caspase-3基因表达到高峰的时间一致，但N组caspase-3基因的表达水平低于S组(P＜0.05)。　　结论:　　1.鞘内注射高浓度利多卡因后脊髓中NGF免疫阳性物质表达上调，以后角白质最为明显。　　2.鞘内注射NGF能够减轻局麻药引起的毒性损伤，其作用机制可能与其抑制caspase-3基因的转录，抑制神经细胞的凋亡有关。