梅(Prunus mume Sieb.et Zucc)为中国主产的名花嘉果,在中国园林和花文化中有着重要的地位和影响。为了进一步选育优良品种、研究品种亲缘关系、有效地保护利用这一优良的种质资源,并为梅品种国际登录和新品种保护提供分子水平品种鉴定技术。本研究在摸索适用于梅花的银染法AFLP分子标记技术体系的基础上,以梅花及其部分近缘种的187个样品为试材,建立了梅花代表性品种种质的DNA指纹图谱。 根据优化的AFLP技术体系和所得到的DNA指纹图谱数据,采用NTSYS2.1t等分析软件,鉴定了167个梅品种、分析探讨了梅与其部分近缘种间的亲缘关系、构建并检验了梅花核心种质。得到以下主要结论: 1.建立并优化了适宜于梅花的AFLP银染反应体系,并在样品采集、DNA提取、酶切连接、两次扩增以及显带等实验过程优化的基础上,得到了稳定、清晰、分辨率较高的指纹谱带。使该技术实验能在普通的分子生物学实验室进行。 2.利用Mse I-EcoR Ⅰ的酶切及引物组合,建立了梅花及其近缘种187份样品的品种(种)的DNA指纹图谱。7对引物组合得到373条多态性条带,平均鉴别效率为95.87%,并以引物组合E-GA/M-CTC为例,利用NTSYS分析软件计算遗传相似性聚类,直观表现品种间的相似程度,说明AFLP能够高效地鉴别梅花品种。但是,一些在形态特征上明显有差异的品种,可能在某一个引物组合的指纹非常相似,而一些形态上非常相似的品种也可能在某一个引物组合下的检测到指纹较大差异。多态性条带率与鉴别效率的相关性较低。所以,AFLP技术与形态学、酶学等技术结合对研究品种鉴定是非常必要的。 3.对梅花品种鉴定及亲缘关系的分析研究,显示了梅花的起源和进化的复杂性,验证了李、山桃、‘紫叶李’等与梅花一些品种的关系。证明了几对远缘杂交的结论。支持了陈俊愉先生将杏梅种系划入梅花的分类。 4.在假定美人梅的父本是宫粉型,并且包括在供试样品中的前提下,以宫粉型梅花、‘紫叶李’与‘美人’梅共计71个样品的AFLP指纹数据,计算Nei’s遗传距离系数、相似性(分别用SM和DICE系数)聚类、排序。初步推测确定‘美人’梅可能的父系为‘蔡山宫粉’、‘清明晚粉’、‘大宫粉’,‘粉玉宫粉’。 5.尝试对梅花核心种质(core collection)进行了构建。利用本研究所获得的AFLP指纹信息,采用Nei’s遗传距离聚类取样方法,从162个品种构成的群体中,选取了52个品种样品作为梅花核心种质。对梅花核心种质进行的遗传多样性检验和实用性分析结果表明:所构建的核心品种样品能够很好地保留原始全部品种样品的遗传多样性以及品种和观赏类型。