当归有效部位调节人脐静脉内皮细胞自噬抗动脉粥样硬化研究

来源 :兰州大学 | 被引量 : 11次 | 上传用户:winchard
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目的:研究当归有效部位如何通过调节人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)自噬流水平,发挥抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)作用。方法:1.当归不同用药部位阿魏酸(ferulic acid,FA)含量比较:高效液相色谱法(High performance liquid chromatography,HPLC)检测当归头、当归身、当归尾中FA含量,色谱柱:Diamonsil C18(4.6 mm×200 mm,5μm);流动相:乙腈:0.1%磷酸(17∶83);流速:1.0 mL/min;进样量:20μL;柱温:35℃;检测波长:316 nm。2.HUVECs分离培养:胶原酶消化法分离HUVECs,用光镜、VWF(F8)因子相关抗原免疫荧光染色法进行细胞鉴定。3.ox-LDL对HUVECs自噬及炎症的影响:不同浓度氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)(0 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、60 mg/L、80 mg/L)在不同时间(0 h、12 h、24 h、48 h)处理HUVECs,Western Blot检测自噬标记蛋白LC3II、p62及炎症相关蛋白MCP-1、VCAM-1、LOX-1的表达;透射电镜(transmission electron microscope,TEM)观察HUVECs内自噬小体的形成情况。4.当归有效部位(有机酸)和FA调节HUVECs自噬及抗炎作用观察:给予FA、当归有效部位(有机酸)、ox-LDL处理HUVECs后,Western Blot检测自噬标记蛋白LC3II、p62及炎症相关蛋白MCP-1、VCAM-1、LOX-1的表达;TEM观察HUVECs内自噬小体的形成情况。结果:1.当归尾中FA含量最高,其次是当归头,当归身中FA含量最低。2.分离的HUVECs在光镜下为椭圆形或长梭形,呈铺路石状排列;TEM观察到细胞浆中有内皮细胞特异性标志W-P小体;免疫荧光染色检测为阳性。3.Western Blot结果显示ox-LDL以剂量(0 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、60 mg/L、80 mg/L)依赖增加MCP-1、VCAM-1、LOX-1、LC3II、p62蛋白的表达,p62在24 h时表达明显;TEM结果显示ox-LDL的浓度为40 mg/L时自噬小体数量最多。4.当归有效部位(有机酸)和FA均能增加LC3II表达,降低p62、MCP-1、VCAM-1、LOX-1蛋白的表达;TEM结果显示当归有效部位(有机酸)促进细胞自噬溶酶体中细胞器降解。结论:当归有效部位(有机酸)通过增强细胞自噬流,减轻炎症反应保护内皮细胞,发挥抗AS的作用。其中起主要作用的成分是FA。
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