和调血脉通肺方防治慢阻肺肺部炎症的作用机理研究

来源 :云南中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:areyoureadygolaopo
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目的:本研究通过气管内滴注脂多糖联合香烟烟熏的方法复制慢阻肺大鼠模型,基于肺部炎症贯穿慢阻肺发生发展全过程,选择云南省名中医李庆生教授从“扶正养血”治疗慢阻肺的临床有效经验方-和调血脉通肺方,观察该方是否能够抑制肺血管重构、调节气道黏膜免疫和修复肠黏膜屏障损伤,改善慢阻肺模型大鼠炎症水平,从肺部炎症的缓解情况初步阐释和调血脉通肺方的作用机理。方法:1、采用气管内滴注脂多糖联合香烟烟熏的方法复制慢阻肺大鼠模型。造模共56天,通过观察大鼠行为学变化及肺组织病理形态改变评价模型是否成功。第57天起中药干预同时继续香烟烟熏,隔天一次,直至实验结束(即第84天)。2、制备和调血脉通肺方水煎剂,中药干预从第57天开始,以灌胃方式给药,每天一次,空白组和模型组灌胃给予同等剂量的生理盐水,共给药28天。3、利用血细胞分析仪检测大鼠血中性粒细胞计数及百分比;通过ELISA检测大鼠血清IL-8、ET-1及VEGF水平,肺组织及结肠组织SIgA水平;通过RT-PCR检测大鼠肺组织IL-1β、TNF-α、HIF-1αmRNA表达水平;通过免疫组化法检测大鼠结肠组织紧密连接蛋白Claudin-1和ZO-1的表达;通过16S rRNA基因高通量测序检测大鼠肺组织及肠内容物的菌群相对丰度。结果:1、与空白组相比,模型组大鼠血中性粒细胞计数和百分比均显著上升(P<0.01),与模型组相比,中药各剂量组大鼠血中性粒细胞计数有下降趋势(P>0.05),中性粒细胞百分比显著下降(P<0.05);与空白组相比,模型组大鼠血清IL-8显著上升(P<0.05),与模型组相比,中药各剂量组IL-8显著下降(P<0.05);与空白组相比,模型组大鼠肺组织IL-1β和TNF-αmRNA相对表达均显著上升(P<0.01),与模型组相比,中药各剂量组IL-1βmRNA有下降趋势(P>0.05),以低、中剂量组显著下降(P<0.05),中药各剂量组TNF-αmRNA相对表达显著下降(P<0.01)。各剂量组未呈现明显随剂量改变的梯度变化。2、与空白组相比,模型组大鼠肺组织维多利亚蓝+Van Gieson染色肺小动脉WT%和WA%显著上升(P<0.05),与模型组相比,中药各剂量组WT%和WA%有下降趋势(P>0.05),以高剂量组WT%显著下降(P<0.05);与空白组相比,模型组大鼠血清ET-1显著上升(P<0.01)、VEGF显著上升(P<0.05),与模型组相比,中药各剂量组ET-1有下降趋势(P>0.05),以低剂量组显著下降(P<0.01),中药各剂量组VEGF显著下降(P<0.05);与空白组相比,模型组大鼠肺组织HIF-1αmRNA相对表达水平显著上升(P<0.05),与模型组相比,中药各剂量组HIF-1αmRNA相对表达水平有下降趋势(P>0.05),以低、高剂量组显著下降(P<0.05)。各剂量组未呈现随剂量改变的梯度变化。3、与空白组相比,模型组大鼠肺组织SIgA显著下降(P<0.05),与模型组相比,中药各剂量组大鼠肺组织SIgA有上升趋势(P>0.05),以高剂量组显著上升(P<0.05);大鼠肺部菌群在门水平,以Proteobacteria(变形菌门)和Firmicutes(厚壁菌门)为主,在属水平,以Ochrobactrum(苍白杆菌属)、Methylobacterium-Methylorubrum和Lactobacillus(乳杆菌属)为主,其次为Ralstonia(雷尔氏菌属)和Mycoplasma(支原体属),其中,Methylobacterium-Methylorubrum和Lactobacillus(乳杆菌属)等13个菌属的相对丰度造模后下降,中药干预后相对丰度上升,Ralstonia(雷尔氏菌属)和Mycoplasma(支原体属)2个菌属的相对丰度造模后上升,中药干预后相对丰度下降。4、与空白组相比,模型组大鼠结肠组织ZO-1和Claudin-1平均光密度均显著下降(P<0.01),与模型组相比,中药各剂量组ZO-1和Claudin-1平均光密度均有上升趋势(P>0.05),以高剂量组显著上升(P<0.01);与空白组相比,模型组大鼠结肠组织SIgA显著下降(P<0.01),与模型组相比,中药各剂量组大鼠结肠组织SIgA有上升趋势(P>0.05),以高剂量组显著上升(P<0.01);大鼠肠内容物菌群在门水平,以Firmicutes(厚壁菌门)和Bacteroidetes(拟杆菌门)为主,在属水平,“Others”占大部分(53.921%-69.053%),其次为unidentified-Ruminococcaceae和Turicibacter,其中,Methanosphaera等3个菌属的相对丰度造模后下降,中药干预后相对丰度上升,Blautia和Cloacibacillus 2个菌属的相对丰度造模后上升,中药干预后相对丰度下降。结论:1、和调血脉通肺方能够改善慢阻肺模型大鼠肺部炎症,抑制肺血管重构。2、和调血脉通肺方能够修复肠黏膜屏障损伤,减缓全身慢性炎症水平。3、和调血脉通肺方益气养血、固表益肺,主要体现在抑制肺血管重构、调节气道黏膜免疫以及修复肠黏膜屏障损伤,从而改善慢阻肺肺部炎症,延缓慢阻肺的进展。
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