玻璃体腔注射尿激酶对大鼠玻璃体腔伊文思蓝浓度的影响

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背景和目的视网膜血管阻塞和视网膜出血是临床眼底病中常见的视网膜疾病类型,它们均可引起视网膜组织细胞损伤而严重损害视力甚至失明。而现今临床尚无安全有效的方法使视网膜阻塞血管再通、视网膜大量出血迅速吸收以及时挽回视力。本实验通过观察玻璃体注射尿激酶(urokinase,UK)对大鼠玻璃体腔内伊文思蓝(evans blue,EB)浓度的影响,评价UK对大鼠血-视网膜屏障(blood-retina barrier, BRB)外向通透性的改变。以期玻璃体腔注射UK后,增BRB的外向通透性,使得UK进入视网膜各层甚至视网膜血管,实现视网膜出血后凝血块的快速的溶解吸收和视网膜血管阻塞后血栓溶解。方法健康Sprague-Dawley(SD)大鼠40只,随机分为实验组和对照组,选定右眼为实验眼。两组大鼠右眼分别行玻璃体腔注射UK350U/4μl和磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)4μl。24h后,所有大鼠右眼再行玻璃体腔注射0.5%EB4μl。4h后处死大鼠并摘取右眼球,对比观察两组眼球颜色。冷冻眼球,尽量完整取出玻璃体,所取玻璃体经真空干燥后甲酰胺温浴萃取EB,所得提取液以甲酰胺-分光光度法测EB的浓度,并据此计算玻璃体腔内EB的浓度,分析对比两组大鼠玻璃体腔EB的浓度。所得实验数据以统计分析软件SPSS17.0做统计学处理。结果手术显微镜下观察摘取大鼠眼球:实验组眼球呈淡蓝色,经瞳孔及淡蓝色玻璃体可见视网膜血管;而对照组眼球显示深蓝色,由于深蓝色玻璃体遮蔽,无法窥见视网膜血管。与对照组相比,实验组大鼠玻璃体腔颜色明显较淡,两组内个体间稍有差异,但不明显。统计分析多次配备测量的甲酰胺EB溶液吸光度,得甲酰胺EB溶液浓度吸光度的标准曲线:y=0.0734x+0.0068,决定系数:R2=0.9996,回归方程有统计学意义。认为甲酰胺EB溶液在0.1~13.33μg/ml浓度范围内,EB在甲酰胺中的含量与其吸光度(A)值呈高度直线相关,检测计算得实验组甲酰胺EB溶液吸光度值和浓度分别为(0.166±0.061)、(2.166±0.838)μg/ml,对照组为(0.474±0.052)、(6.362±0.711)μg/ml。据此及大鼠玻璃体腔容积计算得实验组大鼠玻璃体腔内EB的浓度为(0.243±0.094)g/L,对照组为(0.714±0.079)g/L,实验组明显低于对照组,差异有统计学意义(t=-17.089,P<0.01)。结论玻璃体腔注射UK可增大EB从大鼠玻璃体腔通过BRB向外的渗出,增大大鼠BRB的外向通透性。
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