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背景与目的：非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD）与病毒性肝炎的关系近年来引起学者们广泛关注。研究显示乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)和丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）感染常合并不同程度的肝细胞脂肪变性。我国是慢性乙型肝炎（chronichepatitis B, CHB）大国，发病率始终居于世界前列，HBsAg阳性者占我国人口的7.18%，约1.2亿人，严重影响人们生活水平。慢性丙型肝炎（chronic hepatitis C, CHC）与肝脂肪变的关系较为肯定，而HBV与肝脂肪变性的关系尚存在诸多争议，有研究认为HBV感染合并肝脂肪变主要与宿主代谢因素有关，而与病毒本身关系不大，而另有研究认为HBV与肝脂肪变有密切联系，且是引起脂肪肝的主要因素。乙肝病毒x蛋白是乙肝病毒X基因（Hepatitis B virus X gene，HBx）编码的一种多功能蛋白，在病毒复制中起重要作用。国外研究表明HBx可与肝X受体（liver X receptors， LXRs）相互作用调节脂代谢相关基因的转录，从而实现对肝脏脂代谢的调节。LXRs属于核受体超家族成员，广泛参与机体脂肪代谢、胆固醇代谢等生理活动的调节。HBV感染及相关性疾病是我国面临的严重公共卫生问题，而HBV与脂肪肝的研究在我国刚刚起步，有关CHB合并脂肪肝的发病情况、危险因素、肝细胞脂肪变性对CHB病程进展的影响、与抗病毒治疗应答的关系等诸多未知问题亟待解答。HepG2.2.15细胞是将HBV DNA整合入人肝癌细胞(humanhepatoma cell line G2, HepG2)建立的细胞系，能持续表达HBx，是体外研究HBV的重要细胞模型。HBV是否参与肝脂肪变，其作用和机制如何是本课题的研究重点，本研究结果有助于判断HBV与非酒精性脂肪肝的关系，也能对其发生机制有一定的认识，为HBV感染合并脂肪肝的防治提供理论基础。本实验对比研究HepG2.2.15细胞和HepG2细胞中HBx及LXRα基因表达的差异，构建并筛选有效的shHBx及shLXRα干扰质粒，通过分别干扰HBx和LXRα基因，以及油酸钠或LXRα激动剂T0901317处理细胞，观察HBx对肝细胞脂肪变性及脂代谢基因表达的影响，探讨与LXRα途径的关系，以期从分子生物学角度部分揭示HBV感染与肝细胞脂肪变性的关系及可能机制。方法：1.采用RT-PCR和Western blot方法从mRNA和蛋白水平检测HepG2.2.15细胞和HepG2细胞中HBx及LXRα的表达。2.构建针对HBx基因的特异性干扰质粒，比较沉默HBx基因前后肝细胞脂肪变程度及脂代谢相关基因的表达变化。3.构建针对LXRα基因的特异性干扰质粒，比较沉默LXRα基因前后HBx对肝细胞脂代谢的影响与LXRα途径的关系。结果：1. HepG2.2.15细胞内有HBx和LXRα mRNA及蛋白表达，HepG2细胞中未检测出HBx表达，与HepG2.2.15细胞相比，LXRα表达较少（P＜0.05）。2.成功构建针对HBx基因的特异干扰质粒并筛选出其中干扰效果最佳的shHBx3质粒。沉默HBx基因后，与空白对照组及阴性对照组相比，HBx mRNA及蛋白的表达在HBx1组、HBx2组、HBx3组中均显著降低（P＜0.05），且与HBx1组和HBx2组比较，HBx3组表达量最低（P＜0.05）。3.未加油酸钠情况下，沉默HBx后，shHBx3转染组和HepG2组细胞胞浆中的桔红色脂肪颗粒、SREBP-1c mRNA、LXRα及FAS蛋白表达显著低于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05），而shHBx3转染组和HepG2组差别不大（P＞0.05）；沉默HBx后，予油酸钠处理细胞，各组TG含量、SREBP-1c mRNA、LXRα及FAS蛋白的表达随油酸钠处理时间延长逐渐增多，但同一时间点shHBx3转染组及HepG2组细胞内增加不明显（P＜0.05），而两组相比无明显差异。4.成功构建针对LXRα基因的特异干扰质粒并筛选出其中干扰效果最佳的shLXRα1质粒。转染LXRα质粒后，LXRα mRNA及蛋白表达在LXRα1组、LXRα2组和LXRα3组中显著低于空白对照组和阴性对照组，且LXRα1组表达量明显低于LXRα2和LXRα3组（P＜0.05）5.沉默LXRα后，未加激动剂时，各组HBx蛋白表达差异不大，而细胞内桔红色脂肪颗粒、SREBP-1c mRNA、FAS蛋白在shLXRα1转染组中显著低于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。沉默LXRα后，再加入激动剂处理细胞，同一时间点各组细胞HBx蛋白表达无明显差异（P＞0.05），TG含量、SREBP-1cmRNA和FAS蛋白仍随刺激时间延长逐渐增多，但同一时间点shLXRα1转染组中增加不明显（P＜0.05）。结论：1．与表达HBx的HepG2.2.15细胞比较， LXRα mRNA及蛋白在HepG2细胞的表达均呈低水平。2. HBx是HBV引起肝细胞脂变的重要因素之一，HBx通过LXRα/SREBP-1c/FAS途径参与肝细胞脂代谢的调节。3. HBx增加油酸钠及T0901317诱导肝细胞脂肪沉积的作用，提示HBV感染是脂肪肝的易患因素。