论文部分内容阅读
目的:ZKSCAN3基因是一个锌指转录因子家族的成员。我们在前期发表的工作中证实其调控着重要的基因表达程序,在直肠癌、前列腺癌、骨髓瘤、乳腺癌和宫颈癌等的发生、发展、转移和病理发生过程中,以及细胞自噬调控中发挥着重要的作用。但是,其正常生理条件下的生物学功能仍然大量未知。另外,我们在前期工作中发现zksCan3基因可能是一个B细胞功能的负调控因子。因此,我们构建了 zkscan3敲除小鼠模型。方法:1.UBC-Cre工具鼠和zkscan3 flox/+小鼠进行杂交得到zkscan3基因敲除小鼠。2.检测了 zkscan3在DNA水平、mRNA水平、蛋白水平的表达以检测zkscan3基因敲除的效率。3.统计每种基因型小鼠的数量、重量。观察小鼠的表型变化。4.在野生与敲除小鼠中,用流式检测B细胞发育各个阶段的细胞数量。5.我们构建了 MCA38结直肠癌小鼠模型,流式分析敲除小鼠与野生小鼠中B细胞发育各阶段的数量。6.用LPS体外诱导B细胞分化,流式分析生发中心B细胞和浆细胞数量,用ELISA检测细胞培养的上清液中1gG、1gA、1gM的浓度,7.分选脾脏B细胞进行RNA-sequence分析,用Q-PCR验证RNA-sequence的结果。8.构建zkscan3过表达的细胞株CT26-zkscan3,用荧光素酶报告系统检测xist与zkscan3表达的关系。结果:1.zkscan3在基因敲除小鼠的mRNA水平、DNA水平、蛋白水平都不再表达。2.zkscan3基因敲除小鼠的表型正常,小鼠的出生率符合孟德尔遗传定律。3.在正常生理条件下,zkscan3敲除小鼠与野生小鼠相比,浆细胞数量增加。4.在MCA38结直肠癌小鼠模型中,zkscan3基因敲除小鼠与野生小鼠相比,浆细胞数量增加。5.用LPS刺激后,KO与WT小鼠相比,生发中心B细胞、浆细胞增多、免疫球蛋白1gG、1gA和1gM浓度增加。6.RNA-sequence,Q-PCR结果显示zkscan3敲除小鼠中,xist表达量上调。7.荧光素酶报告基因结果显示zkscan3调控xist的表达。结论:我们成功的构建了 zkscan3基因敲除小鼠模型。与野生小鼠相比,在zkscan3基因敲除小鼠中发现浆细胞数量增加,同时,也发现在结直肠癌移植瘤及LPS诱导的条件下浆细胞数量显著增加。RNA-sequence和Q-PCR数据表明,zkscan3敲除小鼠的脾脏B细胞中的xist表达量上调,荧光素酶报告基因实验结果表明zkscan3调控xist的表达。这说明zkscan3是潜在的浆细胞分化的负调控因子。