论文部分内容阅读
目的:随着肿瘤分子生物学和基因工程技术的迅速发展,人们对肿瘤染色体和基因的研究不断深入,已经观察到绝大多数人类肿瘤都存在非随机性的染色体片段丢失,这些非随机的片段丢失表明这些区域内可能包含有与肿瘤的发生、发展有重大关系的基因存在。近年来,人们通过检测肿瘤组织和其相应的正常组织基因组染色体上特定的DNA微卫星多态标记(polymorphic microsatellite marker),分析杂合性丢失(loss of heterozygosity,LOH),发现若在染色体某一位点处频发杂合性缺失,则可能在此位点附近存在抑癌基因,许多抑癌基因的发现都是通过研究LOH而实现的,因此检测肿瘤细胞染色体上特定的微卫星多态性标记,分析杂合性缺失(LOH)已经成为目前检测肿瘤抑癌基因失活和发现及定位新的抑癌基因的重要手段之一。12号染色体短臂(12p)是一个备受关注的区域,在多种肿瘤中均发现存在高频杂合性缺失,如白血病、淋巴瘤、肺癌等,提示在此区域有1个或多个抑癌基因的存在。但目前,国内外尚未见对胶质瘤人群中12p的杂合性缺失分析的相关报道。本研究运用PCR技术为基础的杂合性缺失分析法对28例胶质瘤染色体12p作了较详细研究,以期探讨12p上可能存在的与胶质瘤发生有关的肿瘤抑制基因的缺失区域,为发现和定位肿瘤抑制基因提供线索和依据。 方法:微卫星的选择和设计,文献中微卫星的选择多选在核型分析的片段丢失区附近。染色体12p片段丢失发生于多种肿瘤中,多种抑癌基因定位于12p某个区域间,我们在染色体12p上选取四个微卫星位点:D12S77,D12S89,D12S98,D12S358进行研究,然后对采集的胶质瘤及相应患者外周血白细胞的DNA进行提取,利用合成的染色体12p上的四对微卫星位点引物,应用聚合酶链反应(PCR)法对28例胶质瘤组织及外周血白细胞的DNA进行扩增,用琼脂糖凝胶电泳检测法