BADH基因转化107杨及构建甜菜碱合成相关酶多基因表达载体

来源 :大连理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liusheng123321
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甘氨酸甜菜碱是一种非常有效的渗透调节剂。高等植物中,甜菜碱以胆碱为底物经两步酶催反应生成,即:胆碱→甜菜碱醛→甜菜碱,催化第一步反应的是胆碱单加氧酶(choline monooxygenase,CMO),催化第二步反应的是甜菜碱醛脱氢酶(betaine aldehyde dehydrogenase, BADH)。转基因研究发现,将BADH基因转入植物中可以有效提高其耐盐性。但到目前为止,还没有BADH基因转化杨树的相关报道。本研究利用农杆菌介导的叶盘法转化,将辽宁碱蓬(Suaeda liaotungesis kitag)的BADH基因导入速生杨107中,以提高其耐盐性。对650个叶片进行抗生素筛选获得25株抗性芽,PCR检测表明,BADH基因已转入到其中10株的基因组中。耐盐筛选表明,转基因植株在NaCl浓度为50、75、100 mmol/L的生根培养基上生长情况都要好于未转化植株。相对电导率测定表明,在同等盐胁迫下转基因植株细胞膜较未转化植株能更好的保持其完整性。叶绿素含量测定表明,在同等盐胁迫下转基因植株叶片叶绿素含量要高于未转化植株。 植物耐盐是多个基因协调控制的结果。如果将甜菜碱合成相关酶基因转入同一植株中,预期会比转入单基因能更有效的提高转基因植株的耐盐性。本研究通过使用一套基于Cre/loxP重组系统的植物多基因表达载体构建系统,将辽宁碱蓬的CMO基因、BADH基因,以及烟草的核基质结合区(matrix attachment regions, MAR)序列,构建到同一表达载体上,得到可直接用于农杆菌转化的植物表达载体pYLTAC747H-MAR-BADH-CMO-MAR,为后续的杨树转化工作奠定了基础。同时,用热激法替代了电击法进行质粒的大肠杆菌转化,并去掉了透析等步骤,简化了构建过程。
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